[發明專利]一種鉛離子檢測試紙條及其制備方法

無效

• 申請號: 201210124736.0
• 申請日: 2012-04-25
• 公開（公告）號: CN102643917A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發明（設計）人: 王澤波;郭智勇;段靜;馬青青;郝婷婷;杜書平
• 申請（專利權）人: 寧波大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/44
• 代理公司: 寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226
• 代理人: 程曉明

技術領域

本發明涉及重金屬離子檢測技術領域，尤其是涉及一種鉛離子檢測試紙條及其制備方法。

背景技術

鉛（Pb），是重金屬之一，在生物體內和環境中殘留時間長，對人體神經系統有嚴重損害，對人體健康產生嚴重威脅。自然界中的鉛主要以離子形式（Pb²⁺）存在，故實現對鉛離子的準確、靈敏、快速的現場檢測非常重要。

目前檢測鉛離子的方法主要有：紫外—可見分光光度法、原子發射光譜法、ICP-MS法、原子吸收光譜法、電化學法、離子色譜法、毛細管電泳法、重金屬快速測定儀法、試紙條法等。紫外—可見分光光度法選擇性差，檢出限高；原子發射光譜法、ICP-MS法、原子吸收光譜法、電化學法、離子色譜法、毛細管電泳法，準確度和靈敏度高，但均需使用特定的儀器，價格昂貴，操作繁瑣，且要求檢測人員具備一定的專業知識，分析成本高，無法應用于現場檢測，難以普及；重金屬快速測定儀法可應用于現場檢測，但靈敏度不高、選擇性差，樣品預處理復雜。與上述方法相比，試紙條法以其快速、簡便而在現場檢測中別具優勢，但基于傳統螯合顯色劑的試紙條，選擇性差，靈敏度低。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種基于納米金(AuNPs)、脫氧核酶(DNAzyme)和條形碼DNA的靈敏度高、選擇性好且成本低的鉛離子檢測試紙條及其制備方法。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：一種鉛離子檢測試紙條，所述的試紙條由條形底板和在條形底板上依次搭接的樣品墊、涂覆特異性條形碼DNA-納米金-脫氧核酶探針的玻璃纖維結合墊、特定包被的硝酸纖維膜和吸水墊組成，所述的特異性條形碼DNA-納米金-脫氧核酶探針在脫氧核酶的一端結合有生物素，其另一端結合有納米金，在納米金表面結合有若干條條形碼DNA，在所述的硝酸纖維膜上，用鏈霉親合素包被直線式質控線C線，用生物素化的俘獲DNA和鏈霉親合素結合的復合物包被直線式檢測線T線，所述的生物素化的俘獲DNA的堿基與所述的特異性條形碼DNA-納米金-脫氧核酶探針表面的條形碼DNA的堿基之間互補配對，所述的特異性條形碼DNA-納米金-脫氧核酶探針的結構為

，所述的生物素化的俘獲DNA的結構為biotin-5'-TTTTTTTTTTTTTTT-3'，所述的納米金的直徑為13～30?nm。

所述的樣品墊為經0.01～0.05?mol/L?Tris-HCl緩沖液浸泡處理的玻璃纖維紙，其中Tris-HCl緩沖液含蔗糖的質量百分比為1～10%，pH值為5.0～8.0。

所述的特異性條形碼DNA-納米金-脫氧核酶探針溶液在所述的玻璃纖維結合墊上的噴涂量為2.0～10.0?μL/cm²，所述的特異性條形碼DNA-納米金-脫氧核酶探針溶液為2?μL的100?μM序列為biotin-3'-ACTGTAGAGAAGG?rA?TATCACAAAAAAAAAAAAAAA-5'-SH的DNA與2?μL的100?μM序列為5'-TGACATCTCTTCTCCGAGCCGGTCGAAATAGTG-3'的DNA混合均勻得脫氧核酶結合物，然后將8?μL的100?μM序列為HS-5'-AAAAAAAAAAAAAAA-3'條形碼DNA與脫氧核酶結合物混合均勻后，將4?mL的50?nM納米金溶液加入上述混合物中，溫育16?h后，離心棄去上清液，沉淀重新溶解于50?μL含100?mM?NaCl和8%蔗糖的25?mM?Tris-HCl緩沖液中所得。

所述的鏈霉親合素包被用量為1.0～3.0?μg/cm。

所述的生物素化的俘獲DNA和鏈霉親合素結合的復合物包被直線式檢測線T線制備過程如下：108?μL的100?μM的生物素化的俘獲DNA溶液與50?μL的2?mg/mL的鏈霉親合素溶液混合均勻，室溫下溫育2?h后，12000?rpm下離心10?min，棄去上清液，用54?μL的25?mM的PBS緩沖液重新溶解后，以1～3?μL/cm噴涂于硝酸纖維膜形成檢測線T線。

一種鉛離子檢測試紙條的制備方法，包括以下步驟：

（1）樣品墊的制備

將玻璃纖維紙用0.01～0.05?mol/L?Tris-HCl緩沖液浸泡潤濕后，在20℃～37℃下干燥4～12小時即得到樣品墊，其中Tris-HCl緩沖液含蔗糖的質量百分比為1～10%，pH值為5.0～8.0；

（2）涂覆特異性條形碼DNA-納米金-脫氧核酶探針的玻璃纖維結合墊的制備