[發明專利]多功能磁性熒光微球及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201210123475.0
• 申請日: 2012-04-25
• 公開（公告）號: CN102703601A
• 公開（公告）日: 2012-10-03
• 發明（設計）人: 羅陽;高維寅;張波;陳鳴;府偉靈
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學第一附屬醫院
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;G01N21/64;C12N5/09;C09K11/88
• 代理公司: 北京同恒源知識產權代理有限公司 11275
• 代理人: 趙榮之

1.多功能磁性熒光微球，其特征在于：所述多功能磁性熒光微球包括磁性納米材料、不同發射光譜特征的熒光材料、橋連DNA和標記有淬滅熒光基團的識別不同靶位點的生物探針，所述磁性納米材料和熒光材料通過橋連DNA連接，所述橋連DNA含有限制性內切酶識別位點，所述生物探針偶聯在所述熒光材料表面。

2.根據權利要求1所述的多功能磁性熒光微球，其特征在于：所述多功能磁性熒光微球是由橋連DNA一端標記的生物素與磁性納米材料表面標記的鏈霉親和素偶聯，所述橋連DNA另一端通過末端標記的氨基與表面修飾有羧基的熒光材料偶聯，所述熒光材料表面修飾的羧基偶聯有至少一種生物探針。

3.根據權利要求1或2所述的多功能磁性熒光微球，其特征在于：所述生物探針為分子信標或/和葉酸。

4.根據權利要求1所述的多功能磁性熒光微球，其特征在于：所述分子信標為識別至少一個靶位點的不同序列的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針一端分別標記有最大發射波長間隔大于30nm的熒光材料，另一端標記淬滅熒光基團。

5.根據權利要求4所述的多功能磁性熒光微球，其特征在于：所述寡核苷酸探針為識別HBV基因型B、HBV基因型C和HBV基因型D的探針；所述識別HBV基因型B的探針如5'-NH₂-cgtccgtcgcagtcccaaatctccacggacg-BHQ2-3'所示，所述識別HBV基因型C的探針如5'-NH₂-cgtccgcctctacttccaggaacatcaaccggacg-BHQ2-3'所示；所述識別HBV基因型D的核苷酸序列如5'-NH₂-?cgtccgcatcatccatataactgaaagccaaacagtgcggacg-BHQ2-3'所示。

6.根據權利要求1或2所述的多功能磁性熒光微球，其特征在于：所述橋連DNA長度為10-40bps。

7.根據權利要求6所述的多功能磁性熒光微球，其特征在于：所述橋連DNA長度為20bps。

8.權利要求1-7任一項所述的多功能磁性熒光微球的制備方法，其特征在于：具體步驟如下：

a、制備磁性納米材料，然后與橋連ssDNA偶聯，制得橋連ssDNA標記的磁性納米材料，所述橋連ssDNA含有限制性內切酶識別位點；

b、取不同發射光譜特征的熒光材料，然后分別與橋連ssDNA的互補序列ssDNA’和標記有淬滅熒光基團的識別不同靶位點的生物探針偶聯，得ssDNA'和生物探針同步標記的熒光材料；

c、將步驟a所得橋連ssDNA標記的磁性納米材料和步驟b所得ssDNA'和生物探針同步標記的熒光材料混合進行雜交，經磁性富集，得多功能熒光微性微球。

9.根據權利要求8所述的多功能磁性熒光微球的制備方法，其特征在于：

所述步驟a是將磁性納米材料表面偶聯鏈霉親和素，然后與5’端標記生物素的橋連ssDNA偶聯；

所述步驟b是將熒光材料的表面進行羧基修飾，然后與氨基標記的與所述橋連ssDNA互補的序列ssDNA'和氨基標記的生物探針偶聯。

10.權利要求1-7任一項所述多功能磁性熒光微球在靶分子檢測或/和靶細胞富集中的應用。