[發明專利]一種Hib多糖與蛋白結合工藝的優化方法有效
| 申請號： | 201210121334.5 | 申請日： | 2012-04-23 |
| 公開（公告）號： | CN102633898A | 公開（公告）日： | 2012-08-15 |
| 發明（設計）人： | 伍長華;吳強;關曉峰;陳克平 | 申請（專利權）人： | 成都歐林生物科技股份有限公司 |
| 主分類號： | C08B37/00 | 分類號： | C08B37/00;A61K39/385;A61K39/102;A61P31/04 |
| 代理公司： | 成都金英專利代理事務所(普通合伙) 51218 | 代理人： | 袁英 |
| 地址： | 610000 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 hib 多糖 蛋白 結合 工藝 優化 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種Hib多糖與蛋白結合工藝的優化方法，其特征在于：它包括以下多糖衍化、多糖-TT結合物制備兩個步驟，其中，所述的多糖衍化包括以下子步驟：
S11：在Hib莢膜多糖中加入注射用水，稀釋成終濃度為1～2?mg／ml的溶液；
S12：加入0.1～0.4倍于多糖質量的CNBr，進行活化處理；
S13：活化完成后，加入3～5倍于多糖質量的SDH，進行偶聯反應；
S14：將偶聯反應所得的反應物分裝于透析袋內，并置于0.02～0.08mol／L的NaCl溶液中透析2～3次，每次透析8～12小時，去除殘余氰化物，然后超濾濃縮至原體積，得到多糖-SDH衍生物；
所述的多糖-TT結合物制備包括以下子步驟：
S21：在多糖-SDH?衍生物溶液中加入等體積的濃度為1～2mg／ml的TT溶液，混均勻后置于冰浴中25～35分鐘，水浴溫度控制為2～8℃；
S22：冰浴完成后，加入EDAC粉末至終濃度為15～25mmol／L，保持pH為4.5～4.9，于2～8℃的溫度條件下反應1.5～2.5h，得到中間反應物；
S23：將中間反應物經Sepharose?4FF凝膠柱分離純化，收集KD值小于0.3的洗脫液，并將收集到的洗脫液進行除菌過濾，得到多糖-TT結合物，并置于2～8℃下保存。
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