[發明專利]b型流感嗜血桿菌高密度培養生產細菌莢膜多糖的方法

有效

• 申請號: 201210121314.8
• 申請日: 2012-04-23
• 公開（公告）號: CN102628068A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發明（設計）人: 李靖;關曉峰;朱沖;魏新;李小兵;楊永華
• 申請（專利權）人: 成都歐林生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C12N1/20;C12R1/21
• 代理公司: 成都金英專利代理事務所(普通合伙) 51218
• 代理人: 袁英

1.b型流感嗜血桿菌高密度培養生產細菌莢膜多糖的方法，其特征在于：它包括以下步驟：

（1）Hib菌種一至四代傳代培養，它包括以下傳代培養步驟：

A、第一代培養：開啟Hib菌種傳代至5～10mlHib液體培養基，放入恒溫搖床振蕩培養16～20h，其中，恒溫搖床振蕩培養的溫度為35～37℃、回旋頻率為250～330rpm；

B、第二代培養：將第一代培養所得的Hib菌種接種到10～20mlHib液體培養基，繼續放入恒溫搖床振蕩培養6～8h，其中，恒溫搖床振蕩培養的溫度為35～37℃、回旋頻率為250～330rpm；

C、第三代培養：將第二代培養所得的Hib菌種接種到20～50mlHib液體培養基，繼續放入恒溫搖床振蕩培養6～8h，其中，恒溫搖床振蕩培養的溫度為35～37℃、回旋頻率為250～330rpm；

D、第四代培養：將第三代培養所得的Hib菌種接種到500～1000mlHib液體培養基，繼續放入恒溫搖床振蕩培養，直到培養基中菌濃度達到100～200億/ml，其中，恒溫搖床振蕩培養的溫度為35～37℃、回旋頻率為250～330rpm；

（2）種子罐培養：將第四代培養所得的Hib菌種接種到種子罐中，恒溫攪拌通氣培養，直到菌濃度達到200～300億/ml，其中，恒溫攪拌通氣培養的溫度為35～37℃、攪拌頻率為100～200rpm；

（3）發酵罐培養：將在種子罐中培養所得的Hib菌種接種到發酵罐中，恒溫攪拌通氣培養，在此過程中向發酵罐中補加濃度為10%的葡萄糖溶液，至Hib細菌至對數生長期后期或靜止期前期，菌濃度達到300～400億/ml時停止攪拌培養，其中，恒溫攪拌通氣培養的溫度為35～37℃、攪拌頻率為200～300rpm；

（4）殺菌、取上清液：向發酵罐中加入甲醛溶液至甲醛終濃度為1～2%進行殺菌，待殺菌完成后，取發酵液上清液；

（5）純化：對上清液進行純化處理，獲得b型流感嗜血桿菌莢膜多糖成品。

2.根據權利要求1所述的b型流感嗜血桿菌高密度培養生產細菌莢膜多糖的方法，其特征在于：所述的Hib液體培養基包括以下重量比的組分：胰蛋白胨10～20，酸水解酪蛋白5～15，酵母提取物5～30，氯化鈉2～8.5，葡萄糖5～20，氯化血紅素0.01～0.03，輔酶I?0.01～0.03。