[發明專利]一種觀賞魚用紅酵母微生態制劑的制備方法

無效

• 申請號: 201210120200.1
• 申請日: 2012-04-24
• 公開（公告）號: CN102715358A
• 公開（公告）日: 2012-10-10
• 發明（設計）人: 呂愛軍;胡秀彩;王藝;胡宏曉
• 申請（專利權）人: 江蘇師范大學
• 主分類號: A23K1/18
• 分類號: A23K1/18;A23K1/16;C12N1/16;C12R1/645
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 高桂珍

1.一種觀賞魚用紅酵母微生態制劑的制備方法，該制備方法包括紅酵母的分離、紅酵母的鑒定及紅酵母微生態制劑的制備；其特征是：無菌操作對斑馬魚的體表用?75%的酒精消毒，取其腸道中部，置于盛有10mL?的無菌生理鹽水的離心管中，剪碎混勻，取適量均勻涂布于馬鈴薯葡萄糖瓊脂PDA培養基上，保持培養基內的溫度為恒溫25-28℃，培養3天；挑選典型菌落轉種到新的馬鈴薯葡萄糖瓊脂PDA培養基上，反復傳代2～3?次，篩選出目的酵母接種到斜面備用；所述的馬鈴薯葡萄糖瓊脂PDA培養基的成分及制備方法為:?去皮馬鈴薯190-210g，葡萄糖?18-20g及瓊脂?13.5-16.5g，由去離子水定容至990-1010?mL，?PH值為7-8，115-126℃條件下滅菌18-22min；紅酵母的鑒定包括生理生化實驗及26S?rDNA?的聚合酶鏈式反應PCR擴增及序列分析；紅酵母微生態制劑的制備方法包括菌株提取、菌株活化、菌株擴培及菌株收集濃縮。

2.根據權利要求1所述的生理生化實驗；其特征是：酵母糖發酵和碳源同化的實驗按常規方法進行，保持培養基內為恒溫25-28℃，培養2～5天，觀察結果。

3.根據權利要求1所述的26S?rDNA?的聚合酶鏈式反應PCR擴增及序列分析；其特征是：提取酵母菌?DNA?后，選取26S?rDNA?D1?/D2?區的PCR?反應體系進行PCR擴增，采用?BLAST?和Clustalx1.?83?程序進行26S?rDNA?序列比對分析，進而構建系統發育樹和置信度檢測。

4.根據權利要求1所述的紅酵母微生態制劑的制備方法；其特征是：①取一株提取的紅酵母菌Rhodotorula?glutinis，在PDA培養基上保持恒溫25-28℃培養3天，在發酵培養基中保持恒溫25-28℃、190-210rpm搖床培養4-6天；所述的發酵培養基為：去皮馬鈴薯190-210g，葡萄糖?18-22g，蛋白胨2.5-3.5g，KH₂PO₄?0.9-1.1g?，MgSO₄0.4-0.6g,由去離子水定容至990-1010?mL，?PH值為7.4，在115-126℃條件下滅菌18-22min；②用牙簽從斜面刮取一塊菌種接種于PDA液體培養基試管中保持恒溫25-28℃，培養3天，再將其接種于發酵培養基試管中保持恒溫25-28℃，培養3天，接種量為10⁶?CFU/ml，反復3次；③將步驟????????????????????????????????????????????????的液體菌種接種于裝有發酵培養基的三角瓶中，在恒溫28℃、200rpm搖床培養5天，接種量為10^6?CFU/ml；④在無菌條件下，將步驟的搖瓶培養菌液用0.22um微濾膜過濾濃縮成500億CFU/ml?菌液。