[發明專利]一種促進美達霉素生物合成的基因工程菌及其應用

有效

• 申請號: 201210120018.6
• 申請日: 2012-04-23
• 公開（公告）號: CN102660488A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 李愛英;萬娟;王慧利
• 申請（專利權）人: 華中師范大學
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/31;C12N15/76;C12P17/16;C12R1/465
• 代理公司: 武漢金堂專利事務所 42212
• 代理人: 丁齊旭

1.一種促進抗生素美達霉素合成的基因工程菌AM-7161/pHSL56.2(Streptomyces?nashvillensis?AM-7161/pHSL56.2)，保藏號為CCTCC?No：M?2012093。

2.一種促進抗生素美達霉素合成的基因工程菌用于美達霉素固體培養生產方法，其特征在于吸取權利要求1所述的工程菌AM-7161/pHSL56.2的孢子懸液接入固體R4產素培養基，進行30℃、5天的培養，用抗生素積累的顏色變化記錄產素水平；收集固體培養物切成小塊，用乙酸乙酯提取美達霉素；每升固體R4產素培養基配方為：瓊脂粉15.0g，葡萄糖10.0g，酵母膏1.0g，酪蛋白水解物0.1g，K₂SO₄0.2g，MgCL₂·6H₂O?10.0g，TES?5.6g，微量元素溶液2毫升，CaCL₂·2H₂O?4.0g，其余為水，pH?7.2；培養基滅菌后添加硫鏈絲菌素終濃度為12.5μg/ml；微量元素溶液配方為：CaCL₂·2H2_O?4.0g/l，L-Proline?3.0g/l，其余為水，pH?7.2。

3.一種促進抗生素美達霉素合成的基因工程菌用于美達霉素液體培養生產方法，其特征在于吸取權利要求1所述的工程菌AM-7161/pHSL56.2的孢子懸液轉入種子培養基中進行30℃、200轉/分鐘培養兩天；將獲得的種子培養物轉接到液體R4產素培養基中，30℃、200轉/分鐘條件下培養4-7天，對發酵液進行離心，收集上清液，調整pH至中性，乙酸乙酯萃取后，用LC/MSn檢測美達霉素產量；每升種子培養基配方：酵母膏1.0g，蛋白胨3.0g，牛肉膏3.0g，葡萄糖20.0g，NaCl?3.0g，CaCO₃10.0g，其余為水，pH?7.0；每升液體R4產素培養基配方為：葡萄糖10.0g，酵母膏1.0g，酪蛋白水解物0.1g，K₂SO₄0.2g，MgCL₂·6H₂O?10.0g，TES?5.6g，微量元素溶液2毫升，CaCL₂·2H₂O?4.0g，其余為水；培養基滅菌后添加硫鏈絲菌素終濃度為12.5μg/ml；微量元素溶液配方為：CaCL₂·2H₂O?4.0g/l，L-Proline?3.0g/l，其余為水，pH?7.2。

4.一種促進抗生素美達霉素合成的基因工程菌應用方法，其特征在于把含有鏈霉菌核糖體再循環因子的高效表達質粒pHSL56.2直接導入的鏈霉菌菌株還有能產生kalafungin的Streptomyces?tanashiesis，或能產生nanaomycin的Streptomyces?rosa，或能產生granaticin的Streptomyces?olivaceus，或能產生frenolicin的Streptomyces?fradiae，或能產生julimycin的Streptomyces?shiodaensis，或能產生capoamycin及cyclacidin的Streptomyces?capoamus。