[發明專利]桑樹查爾酮異構酶基因及應用

有效

• 申請號: 201210119487.6
• 申請日: 2012-04-23
• 公開（公告）號: CN102643846A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發明（設計）人: 余茂德;李軍;劉長英;趙愛春;王茜齡;張瓊予;金筱耘;呂蕊花;吳存容
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12N15/61
• 分類號: C12N15/61;C12N9/90;C12N15/10;C12N15/70;C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 重慶弘旭專利代理有限責任公司 50209
• 代理人: 周韶紅

1.桑樹查爾酮異構酶基因MaCHI，其特征在于具有說明書序列表所示的桑樹查爾酮異構酶基因核苷酸全序列、桑樹查爾酮異構酶基因開放閱讀框ORF序列及3′端非編碼區、桑樹查爾酮異構酶基因編碼的氨基酸序列，以及在此序列基礎上進行密碼子優化或點突變所產生的與原始序列相似度在90%以上的序列。

2.權利要求1所述的桑樹查爾酮異構酶基因全長的克隆方法，其特征在于依次通過以下步驟實現：

1）??根據薔薇科植物草莓或蘋果的查爾酮異構酶基因保守序列設計兼并引物，以桑樹葉片基因組為模板，擴增桑樹查爾酮異構酶基因的保守區域；

2）??基于獲得的桑樹查爾酮異構酶基因的保守區域設計基因特異引物，采用接頭PCR獲得保守區域的側翼序列；

3）??采用軟件sequencher（http://genecodes.com/）將獲得的側翼序列與保守區域序列進行拼接，采用NCBI網站的blastx程序預測拼接序列中含有的基因開放閱讀框（ORF）及編碼的氨基酸序列；

4）以桑樹葉片cDNA為模板擴增桑樹查爾酮異構酶基因開放閱讀框（ORF），并連接到pMD19-T?Vector（TaKaRa），挑選陽性克隆并測序。????

3.權利要求1所述桑樹查爾酮異構酶基因MaCHI的應用，其特征在于將該基因應用于真核及原核表達。

4.權利要求1所述桑樹查爾酮異構酶基因MaCHI應用于過量表達提高桑樹類黃酮的含量。

5.權利要求1所述桑樹查爾酮異構酶基因MaCHI應用于抑制查爾酮異構酶基因的表達獲得新的轉基因株系。

6.權利要求1所述桑樹查爾酮異構酶基因MaCHI應用于其他植物品種的轉基因。