[發明專利]用于ELISA檢測黃曲霉毒素的標準品通用替代物、其制備方法及黃曲霉毒素ELISA檢測方法

無效

• 申請號: 201210117617.2
• 申請日: 2012-04-20
• 公開（公告）號: CN102746403A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 李培武;管笛;張奇;張文;丁小霞
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: C07K16/42
• 分類號: C07K16/42;C07K16/06;G01N33/53
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

技術領域

本發明屬黃曲霉毒素檢測領域，具體涉及用于ELISA檢測黃曲霉毒素的標準品通用替代物、其制備方法及黃曲霉毒素ELISA檢測方法。

背景技術

黃曲霉毒素主要是由黃曲霉菌（Aspergillus?flavs）、寄生曲霉菌（Aspergillus?parasiticus）和集蜂曲霉菌（Aspergillus?nonius）產生的一組高毒和強致癌的次生代謝產物，主要有黃曲霉毒素B1（Aflatoxin?B₁，AFB₁），黃曲霉毒素M1（Aflatoxin?M₁，AFM₁），黃曲霉毒素G1（Aflatoxin?G₁，AFG₁）。其廣泛存在于各種農產品、食品和飼料中，嚴重污染花生、稻米、玉米、小麥等糧油產品，極大威脅人民的身體健康和生命安全。由于黃曲霉毒素對人類的潛在威脅日趨嚴重，世界上已有100多個國家對農產品食品中黃曲霉毒素的含量進行了嚴格的限量要求。因此迫切需要操作簡單、快速、高通量的檢測技術對污染物進行監控、檢測。免疫學檢測技術具有靈敏度高、樣品前處理簡單、操作方便的特點。其中酶聯免疫吸附法（Enzyme-Linked?Immunosorbent?Assay,?ELISA）具有檢測通量高、樣品需要量少的優點，已廣泛應用于食品及農產品中黃曲霉毒素的檢測。由于ELISA法定量時需要競爭反應和標準曲線，檢測過程中需應用大量黃曲霉毒素標準品進行質控，且檢測不同的黃曲霉毒素需要不同的黃曲霉毒素標準品。并且，這些高毒強致癌物質的使用會對操作人員和環境帶來極大的危害，且因價格昂貴、供應緊張，經常影響檢測過程的進行。因此急需一種安全、低成本的ELISA檢測黃曲霉毒素的標準品通用替代物會大大降低檢測過程的風險，簡化檢測步驟。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供用于ELISA檢測黃曲霉毒素的標準品通用替代物、其制備方法及黃曲霉毒素ELISA檢測方法。該標準品通用替代物無毒無害，可分別通過替代黃曲霉毒素ELISA檢測方法中的各相應黃曲霉毒素標準品來定量檢測樣品中各相應黃曲霉毒素濃度。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案為：

用于ELISA檢測黃曲霉毒素的標準品通用替代物，其特征在于：它為可識別各鼠源抗黃曲霉毒素單克隆抗體的兔抗鼠抗體。

按上述方案，所述抗黃曲霉毒素單克隆抗體優選為抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體、抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體和抗黃曲霉毒素G1單克隆抗體。

用于ELISA檢測黃曲霉毒素的標準品通用替代物的制備方法，其特征在于：它是以鼠源抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體、抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體和抗黃曲霉毒素G1單克隆抗體作為混合抗原，經免疫新西蘭長耳大白兔，頸動脈取血，血清親和純化后獲得的。

按上述方案，所述的抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體為由保藏編號為CCTCC?NO.?C201014????的雜交瘤細胞株3G1分泌產生的抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體3G1；所述的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體為由保藏編號為CCTCC?NO.?C201018的雜交瘤細胞株2C9分泌產生的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體2C9，所述的抗黃曲霉毒素G1單克隆抗體1C8為由保藏編號為CCTCC?NO.?C201017的雜交瘤細胞株1C8分泌產生的抗黃曲霉毒素G1單克隆抗體1C8；所述抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體3G1，抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體2C9和抗黃曲霉毒素G1單克隆抗體1C8為等摩爾量配比作混合抗原。

用于ELISA檢測黃曲霉毒素的標準品通用替代物在黃曲霉毒素ELISA檢測中的應用。

黃曲霉毒素ELISA檢測方法，其特征在于：它包括以下步驟：

（1）采用常規間接競爭ELISA方法，將標準品通用替代物取代各黃曲霉毒素標準品，分別建立各相應黃曲霉毒素標準品通用替代物ELISA標準分析曲線方程a（x₁，y₁），

——x₁為各相應黃曲霉毒素標準品通用替代物的濃度，y₁為抑制率；

（2）采用常規間接競爭ELISA方法，測定待測樣品的抑制率；