[發明專利]用于ELISA檢測黃曲霉毒素的標準品通用替代物、其制備方法及黃曲霉毒素ELISA檢測方法

無效

• 申請號: 201210117617.2
• 申請日: 2012-04-20
• 公開（公告）號: CN102746403A
• 公開（公告）日: 2012-10-24
• 發明（設計）人: 李培武;管笛;張奇;張文;丁小霞
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院油料作物研究所
• 主分類號: C07K16/42
• 分類號: C07K16/42;C07K16/06;G01N33/53
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 喬宇

1.用于ELISA檢測黃曲霉毒素的標準品通用替代物，其特征在于：它為可識別各鼠源抗黃曲霉毒素單克隆抗體的兔抗鼠抗體。

2.根據權利要求1所述的用于ELISA檢測黃曲霉毒素的標準品通用替代物，其特征在于：所述抗黃曲霉毒素單克隆抗體為抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體、抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體和抗黃曲霉毒素G1單克隆抗體。

3.根據權利要求1或2所述的用于ELISA檢測黃曲霉毒素的標準品通用替代物的制備方法，其特征在于：它是以鼠源抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體、抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體和抗黃曲霉毒素G1單克隆抗體作為混合抗原，經免疫新西蘭長耳大白兔，頸動脈取血，血清親和純化后獲得的。

4.根據權利要求3所述的用于ELISA檢測黃曲霉毒素的標準品通用替代物的制備方法，其特征在于：所述的抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體為由保藏編號為CCTCC?NO.?C201014的雜交瘤細胞株3G1分泌產生的抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體3G1；所述的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體為由保藏編號為CCTCC?NO.?C201018的雜交瘤細胞株2C9分泌產生的抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體2C9，所述的抗黃曲霉毒素G1單克隆抗體1C8為由保藏編號為CCTCC?NO.?C201017的雜交瘤細胞株1C8分泌產生的抗黃曲霉毒素G1單克隆抗體1C8；所述抗黃曲霉毒素B1單克隆抗體3G1，抗黃曲霉毒素M1單克隆抗體2C9和抗黃曲霉毒素G1單克隆抗體1C8為等摩爾量配比作混合抗原。

5.用于ELISA檢測黃曲霉毒素的標準品通用替代物在黃曲霉毒素ELISA檢測中的應用。

6.黃曲霉毒素ELISA檢測方法，其特征在于：它包括以下步驟：

（1）采用常規間接競爭ELISA方法，將標準品通用替代物取代各黃曲霉毒素標準品，分別建立各相應黃曲霉毒素標準品通用替代物ELISA標準分析曲線方程a（x₁，y₁），

——x₁為各相應黃曲霉毒素標準品通用替代物的濃度，y₁為抑制率；

（2）采用常規間接競爭ELISA方法，測定待測樣品的抑制率；

（3）將步驟（2）得到的待測樣品抑制率相應代入步驟（1）的曲線方程中，然后將計算得到的各相應黃曲霉毒素標準品通用替代物的濃度結果代入各相應黃曲霉毒素標準品濃度和各相應黃曲霉毒素標準品通用替代物濃度的對應關系換算方程b（x₁，x₂），——x₁為各相應黃曲霉毒素標準品通用替代物的濃度，x₂為各相應黃曲霉毒素標準品的濃度——，計算得到待測樣品中各相應黃曲霉毒素的濃度。

7.根據權利要求6所述的黃曲霉毒素ELISA檢測方法，其特征在于：所述步驟（3）為：相應結合各相應黃曲霉毒素標準品通用替代物ELISA分析曲線方程a（x₁，y₁），——x₁為各相應黃曲霉毒素標準品通用替代物的濃度，y₁為抑制率——，和各相應黃曲霉毒素標準品濃度和各相應黃曲霉毒素標準品通用替代物濃度的對應關系換算方程b（x₁，x₂），——x₁為各相應黃曲霉毒素標準品通用替代物的濃度，x₂為各相應黃曲霉毒素標準品的濃度——，得到：在標準品通用替代物做ELISA標準分析曲線下抑制率與各相應黃曲霉毒素濃度的曲線方程e（y₁，x₂），——y₁為抑制率，x₂為各相應黃曲霉毒素濃度；

將步驟（2）得到的待測樣品抑制率代入上述曲線方程e（y₁，x₂），計算得到待測樣品中各相應黃曲霉毒素的濃度。