[發明專利]免疫生物芯片再生方法及再生免疫生物芯片

有效

• 申請號: 201210117167.7
• 申請日: 2012-04-19
• 公開（公告）號: CN102662053A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 曲炳郡;雷博
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

技術領域

本發明涉及免疫生物芯片再生方法及再生免疫生物芯片。

背景技術

生物芯片，通過將抗體、核酸等生物分子固定在芯片基體上，用感知器探測生物分子的力、熱、光、電等物理信息，從而探測到生物分子的信息，其為人類探知與生命相關的信息提供了途徑。免疫生物芯片是生物芯片的一種，用于探測和免疫現象有關的生物分子信息，并將探測到的信息轉化成電信號，以便處理，是免疫學研究、疾病診斷、治療和防治的重要工具。但是，現階段，免疫生物芯片制造工藝復雜，成本高昂，而將使用過的免疫生物芯片再生能夠降低使用生物芯片的成本。

然而，目前的免疫生物芯片再生方法仍有待改進。

發明內容

本發明是基于發明人的下列發現而完成的：

對于檢測抗原類型的芯片，再生的原理是將抗原從抗體上去除，可重新檢測抗原；或者將抗原和抗體都去除，重新固定抗體。基于這些原理，對檢測抗原類型的免疫生物芯片，現有的再生方法有電化學法、酸堿法、強氧化法以及替換法。然而，這些方法工藝難度大、效率低、制造成本高，并且獲得的再生免疫生物芯片的靈敏性較低，使用壽命有限。

本發明旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本發明提供了檢測抗原類型的免疫生物芯片再生方法。

根據本發明的一個方面，本發明提供了一種免疫生物芯片再生方法，其中，免疫生物芯片包括芯片基體和第一抗體的Fc片段，該第一抗體的Fc片段形成于芯片基體上。根據本發明的實施例，該方法包括：使用固定劑對免疫生物芯片進行固定化處理，以便使得第一抗體的Fc片段攜帶正電荷；以及將經過固定化處理的免疫生物芯片與全長第二抗體混合，以便使得全長第二抗體與攜帶正電荷的第一抗體的Fc片段通過靜電作用結合，從而形成攜帶第二抗體的免疫生物芯片。

根據本發明的具體示例，利用本發明的免疫生物芯片再生方法，能夠有效地使免疫生物芯片再生，并且再生工藝簡單、需時少、效率高、再生成本低，獲得的再生免疫生物芯片靈敏性高，使用壽命長。

根據本發明的實施例，在本發明的免疫生物芯片再生方法中，第一抗體的Fc片段是通過使用分解劑對全長第一抗體進行消化而得到的，其中，全長第一抗體形成于芯片基體上，并且全長第一抗體結合有抗原。由此，使用過的免疫生物芯片上的全長第一抗體經分解劑的消化處理后，僅保留芯片基體和形成于其上的第一抗體的Fc片段，從而基于本發明的免疫生物芯片再生方法后續的固定化處理以及與全長第二抗體混合，能夠有效地獲得再生免疫生物芯片，即攜帶第二抗體的免疫生物芯片。

根據本發明的實施例，在本發明的免疫生物芯片再生方法中，分解劑的種類不受特別限制。根據本發明的具體示例，分解劑可以為蛋白酶、強酸或強堿。其中，根據本發明的實施例，強酸的種類也不受特別限制。根據本發明的具體示例，強酸可以為選自鹽酸、硫酸以及硝酸的至少一種。根據本發明的實施例，強堿的種類也不受特別限制。根據本發明的具體示例，強堿可以為選自氫氧化鈉和氫氧化鉀的至少一種。此外，根據本發明的實施例，蛋白酶的種類也不受特別限制。根據本發明的具體示例，蛋白酶可以為選自胃蛋白酶、胰蛋白酶以及木瓜蛋白酶的至少一種，優選胃蛋白酶。這是因為，胃蛋白酶是專門分解包括抗體在內的蛋白質的一種酶。當在本發明的免疫生物芯片再生方法中采用胃蛋白酶作為分解劑對全長第一抗體進行消化時，胃蛋白酶會在全長第一抗體的鉸鏈區將其分解為三個片段，即兩個Fab片段和一個Fc片段，并且第一抗體的Fc片段保留在芯片基體上，而Fab片段會在后續步驟中通過利用去離子水沖洗而去除。其中，胃蛋白酶的濃度、pH以及溫度有一定的限制，本領域的技術人員可以根據實際實驗情況進行選擇。根據本發明的具體示例，分解劑為1～10g/L，pH＝0.5～2.0的胃蛋白酶水溶液。根據本發明的一些實施例，胃蛋白酶水溶液的溫度為25～37℃。由此，能夠充分有效地對全長第一抗體進行消化。

根據本發明的實施例，在本發明的免疫生物芯片再生方法中，使用分解劑對全長第一抗體進行消化的時間不受特別限制，本領域的技術人員可以根據實際實驗情況選擇最適的消化時間。根據本發明的具體示例，使用分解劑對全長第一抗體進行消化5～10分鐘。由此，能夠充分有效地對全長第一抗體進行消化。