[發明專利]免疫生物芯片再生方法及再生免疫生物芯片

有效

• 申請號: 201210117167.7
• 申請日: 2012-04-19
• 公開（公告）號: CN102662053A
• 公開（公告）日: 2012-09-12
• 發明（設計）人: 曲炳郡;雷博
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 李志東

1.一種免疫生物芯片再生方法，所述免疫生物芯片包括芯片基體和第一抗體的Fc片段，所述第一抗體的Fc片段形成于所述芯片基體上，

其中，所述方法包括：

使用固定劑對所述免疫生物芯片進行固定化處理，以便使得所述第一抗體的Fc片段攜帶正電荷；以及

將經過固定化處理的免疫生物芯片與全長第二抗體混合，以便使得所述全長第二抗體與所述攜帶正電荷的第一抗體的Fc片段通過靜電作用結合，從而形成攜帶第二抗體的免疫生物芯片。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一抗體的Fc片段是通過使用分解劑對全長第一抗體進行消化而得到的，

其中，所述全長第一抗體形成于所述芯片基體上，并且所述全長第一抗體結合有抗原，

任選地，所述分解劑為蛋白酶、強酸或強堿，

任選地，所述強酸為選自鹽酸、硫酸以及硝酸的至少一種，

任選地，所述強堿為選自氫氧化鈉和氫氧化鉀的至少一種，

任選地，所述蛋白酶為選自胃蛋白酶、胰蛋白酶以及木瓜蛋白酶的至少一種，優選胃蛋白酶，

優選地，所述分解劑為1～10g/L，pH＝0.5～2.0的胃蛋白酶水溶液，

任選地，所述胃蛋白酶水溶液的溫度為25～37℃，

任選地，使用分解劑對全長第一抗體進行消化5～10分鐘。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一抗體的Fc片段是通過使用洗脫劑對免疫生物芯片進行處理而得到的，

其中，所述免疫生物芯片進一步包括：

全長第三抗體，所述全長第三抗體與所述第一抗體的Fc片段通過靜電結合，并且所述全長第三抗體結合有抗原，

任選地，所述洗脫劑為選自強酸或強堿的任意一種，

任選地，所述強酸為選自鹽酸、硫酸以及硝酸的至少一種，

任選地，所述強堿為選自氫氧化鈉和氫氧化鉀的至少一種，

優選地，所述洗脫劑為0.04～4g/L，pH＝11.0～13.0的氫氧化鈉水溶液，

任選地，使用洗脫劑對免疫生物芯片進行處理5～10分鐘。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，利用偶聯劑使所述第一抗體的Fc片段與所述芯片基體相連，

任選地，所述偶聯劑為選自硅烷試劑、高分子聚合物、巰基烷醇和巰基酸的至少一種。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，進行所述固定化處理之前以及之后，進一步包括將所述免疫生物芯片以及所述經過固定化處理的免疫生物芯片進行清洗的步驟，

任選地，利用去離子水進行所述清洗5次。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述固定劑為氨水、金屬氯化鹽、金屬硫酸鹽或金屬氰化鹽，

任選地，所述金屬氯化鹽為選自三氯化鐵、氯化銅、氯化鋁和氯化錳的至少一種，所述金屬硫酸鹽為選自硫酸鐵、硫酸亞鐵、硫酸鋁和硫酸錳的至少一種，所述金屬氰化鹽為選自氰化鐵、氰化銅和氰化錳的至少一種，

優選地，所述固定劑為1％體積濃度的氨水溶液或10～30g/L的三氯化鐵水溶液，

任選地，進行所述固定化處理5～10分鐘。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述全長第二抗體以全長第二抗體的緩沖液的形式提供，

任選地，所述全長第二抗體以全長第二抗體的磷酸鹽緩沖液的形式提供，

任選地，所述全長第二抗體的磷酸鹽緩沖液是所述全長第二抗體和pH＝7.0～7.5的磷酸鹽緩沖液的混合溶液，且在所述全長第二抗體的磷酸鹽緩沖液中，所述全長第二抗體的濃度為50～100mg/L，磷酸鹽的濃度為0.03～0.5mol/L。

8.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，將所述經過固定化處理的免疫生物芯片與所述全長第二抗體混合15～20分鐘。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，進一步包括利用封閉劑將所述攜帶第二抗體的免疫生物芯片進行封閉處理的步驟，

任選地，所述封閉劑為選自牛血清白蛋白、脫脂奶粉、小牛血清、羊血清和絡蛋白的至少一種，優選牛血清白蛋白磷酸鹽緩沖液，

任選地，所述牛血清白蛋白磷酸鹽緩沖液是通過將1～5g/L的牛血清白蛋白溶解于pH＝7.4的磷酸鹽緩沖液中獲得的，

任選地，進行所述封閉處理5～10分鐘。

10.一種再生免疫生物芯片，其特征在于，其是由權利要求1-9任一項所述的方法獲得的。