[發(fā)明專利]一種橈足類中纖維二糖酶活力的測(cè)定方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201210116912.6 | 申請(qǐng)日： | 2012-04-20 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN102634566A | 公開(kāi)（公告）日： | 2012-08-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 謝志浩;屠燕萍;俞泓伶 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 寧波大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/34 | 分類號(hào)： | C12Q1/34;C12Q1/32;C12Q1/48;G01N21/31 |
| 代理公司： | 寧波奧圣專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33226 | 代理人： | 程曉明 |
| 地址： | 315211 浙*** | 國(guó)省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說(shuō)明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 橈足類中 纖維 二糖酶 活力 測(cè)定 方法 | ||
1.一種橈足類中纖維二糖酶活力的測(cè)定方法，其特征在于步驟如下：
a、將5-15只橈足類動(dòng)物置于研缽中，加入濃度為1mM的三羥甲基氨基甲烷-HCl緩沖液500μl，冰浴研磨成勻漿液，在15000?rpm、0-4℃下，冷凍離心機(jī)離心10min，取上清液待用；
b、將1mg纖維二糖加入到1毫升濃度為100mM的醋酸溶液中，加熱溶解得到纖維二糖醋酸液，取上述上清液80μl與420μl所述纖維二糖醋酸液混勻，在20℃水浴溫育2h，然后在95℃水浴2min，終止反應(yīng)得到水浴產(chǎn)物；
c、取上述水浴產(chǎn)物40μl，與1ml濃度為50mM?的三羥甲基氨基甲烷-HCl緩沖液，0.5ml濃度為1mM的MgCl2液，0.5ml濃度為0.5mM的二硫蘇糖醇液，1ml濃度為1μg?/ml的己糖激酶液，1ml濃度為30μM的氧化型輔酶Ⅱ液，1ml濃度為300μM的腺嘌呤核苷三磷酸液，1ml濃度為0.02U/ml的?6-磷酸葡萄糖脫氫酶液混合，攪拌均勻，酶促反應(yīng)10min，得到含還原型輔酶Ⅱ的酶促產(chǎn)物；
d、用移液器吸取上述酶促產(chǎn)物置于熒光分光光度計(jì)中，在激發(fā)波長(zhǎng)為340nm，發(fā)射波長(zhǎng)為450nm下測(cè)量還原型輔酶Ⅱ的吸光值，根據(jù)公式0.2737×吸光值?-?0.4518計(jì)算得到還原型輔酶Ⅱ的總濃度；
e、根據(jù)下述公式計(jì)算樣品中每只浮游動(dòng)物的纖維二糖酶活力，纖維二糖酶活力=?A×6÷833.35×180×500÷80×500÷40÷2÷B，公式中A為還原型輔酶Ⅱ的總濃度，B為橈足類動(dòng)物的只數(shù)。
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