[發(fā)明專利]一種腫瘤治療用外包體疫苗聯(lián)合DC-CIK新技術(shù)

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210116253.6
• 申請(qǐng)日: 2012-04-19
• 公開（公告）號(hào): CN103372204A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 孫勇
• 主分類號(hào): A61K39/00
• 分類號(hào): A61K39/00;A61K35/14;A61P35/00;C12N5/0783;C12N5/0784
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明是利用患者自身的樹突狀細(xì)胞(DC)分泌的外包體、DC細(xì)胞和單核細(xì)胞制備用于腫瘤治療的外包體疫苗聯(lián)合DC及相關(guān)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)，本發(fā)明涉及基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)、生物制藥和腫瘤治療科學(xué)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

癌癥已成為人類的第一大殺手，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年約有1270萬(wàn)人新發(fā)病例，760人死亡，并且逐年增加。臨床治療都以手術(shù)、放療及化療為主，也取得了相當(dāng)?shù)闹委熜Ч?，使得腫瘤患者的生存率有了很大的提高，生存期也有所延長(zhǎng)。但是，腫瘤患者的預(yù)后仍然較差，其5年生存率也僅50％左右，主要原因是由于治療后殘留的癌細(xì)胞引起的高復(fù)發(fā)率。近年臨床研究和治療證明，免疫生物治療能進(jìn)一步根除手術(shù)、化/放療以及造血干細(xì)胞移植后體內(nèi)殘留的腫瘤細(xì)胞，減少和預(yù)防腫瘤治療后的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。免疫生物治療對(duì)延長(zhǎng)腫瘤患者的生存期，提高患者的生活質(zhì)量，具有重要意義。

胞外體(Exosome，EXO)是真核細(xì)胞釋放的，含有多種細(xì)胞膜分子以及相關(guān)蛋白的小囊泡。系由細(xì)胞內(nèi)的多泡體(multivesicular?bodies，MVBs)膜與細(xì)胞膜融合后釋放到細(xì)胞外環(huán)境中囊泡狀結(jié)構(gòu)。EXO除了從細(xì)胞培養(yǎng)的上清液中分離純化外，還可從血液以及腫瘤患者的惡性滲出液(如胸水，腹水)中提取。從腫瘤患者胸、腹水分離的EXO攜帶有相關(guān)的腫瘤抗原，并能誘導(dǎo)出相關(guān)腫瘤抗原特異性的免疫反應(yīng)。近年來(lái)的基礎(chǔ)和臨床研究表明，各種細(xì)胞包括腫瘤(tumour)細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞(dendrocyte，DC)所分泌的EXO，負(fù)載有腫瘤相關(guān)抗原，且表達(dá)MHCI和II類抗原以及激發(fā)腫瘤特異性免疫應(yīng)答反應(yīng)的T細(xì)胞共刺激分子。其中，DC來(lái)源的胞外體(DC-derived?exosomes，DEX)負(fù)載的腫瘤相關(guān)抗原引起更加強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答。因此，EXO作為一種新型的非細(xì)胞疫苗，其理化性質(zhì)、生物學(xué)及免疫學(xué)特性方面符合作為疫苗應(yīng)具備的基本要求：安全、有效、穩(wěn)定和實(shí)用，并且其安全性、免疫原性和耐受性已經(jīng)得到臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

樹突狀細(xì)胞(Dendritic?Cells，DC)由Steinman在1973年描述，是體內(nèi)最活躍、功能最強(qiáng)大的專職抗原提呈細(xì)胞。在大多數(shù)組織中，DC以不成熟形式存在，在M-CSF、IL-4和TNF-a的作用下，產(chǎn)生成熟的樹突狀細(xì)胞，并能激發(fā)靜息的T細(xì)胞，啟動(dòng)T細(xì)胞介導(dǎo)的特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)。樹突狀細(xì)胞通過(guò)下面三條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑來(lái)激活靜息T淋巴細(xì)胞：DC的MHC分子與胞內(nèi)加工處理后的抗原肽形成復(fù)合體，為激活靜息的T淋巴細(xì)胞提供第一信號(hào)；共刺激分子及黏附分子(如：CD80/CD86)與T淋巴細(xì)胞膜表面的配體(如CD28等)結(jié)合，提供第二信號(hào)；DC合成和分泌一些重要的細(xì)胞因子(如IL-12和IFN-a)，提供第三信號(hào)。這三條已知的途徑共同作用促進(jìn)了T淋巴細(xì)胞的活化。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(cytokine-induced?killers，CIK)是一群CD3+CD56+異質(zhì)性細(xì)胞群，兼具有T細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性與NK細(xì)胞非MHC限制性殺瘤特點(diǎn)。DC-CIK共培養(yǎng)具有協(xié)同抗瘤效應(yīng)，負(fù)載腫瘤抗原的DC能顯著提升CIK的殺瘤特異性，同時(shí)CIK能促進(jìn)DC的共刺激分子表達(dá)增加。DC聯(lián)合相關(guān)細(xì)胞因子(M-CSF，IL-4等)誘導(dǎo)單核細(xì)胞產(chǎn)生的CIK在抗腫瘤免疫中有重要作用。DC-CIK細(xì)胞在抗腫瘤細(xì)胞中有互補(bǔ)作用，聯(lián)合應(yīng)用臨床已經(jīng)證明取得了協(xié)同療效。

綜上所說(shuō)，主動(dòng)免疫的外包體腫瘤疫苗聯(lián)合被動(dòng)免疫的DC-CIK細(xì)胞回輸治療腫瘤患者，具有比傳統(tǒng)療法適用面廣、無(wú)毒副作用、采血量少、療效更加明顯等優(yōu)點(diǎn)。尤其是腫瘤病人在手術(shù)、化療和放療后，運(yùn)用外包體腫瘤疫苗聯(lián)合DC-CIK治療，腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移率大大降低，極大地提高了腫瘤患者的生活質(zhì)量和生存率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明是一種腫瘤治療用外包體疫苗聯(lián)合DC-CIK新技術(shù)。外包體富含腫瘤相關(guān)抗原，作為腫瘤疫苗無(wú)毒、安全、可靠有效。利用腫瘤患者的造血干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成DC，并培養(yǎng)后者收集上清液而獲得富含腫瘤抗原的外包體。將腫瘤患者的造血干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成CIK，并將其與DC共培養(yǎng)，產(chǎn)生更強(qiáng)大的殺傷作用和腫瘤抗原遞呈作用。因此，外包體疫苗聯(lián)合DC-CIK治療腫瘤是防止腫瘤復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的良好方法，大大提供病人的生存質(zhì)量。

具體實(shí)施方式

通過(guò)本實(shí)施例來(lái)具體說(shuō)明本發(fā)明技術(shù)，利用患者自身DC分泌外包體制備的疫苗，聯(lián)合DC及相關(guān)細(xì)胞因子誘導(dǎo)CIK細(xì)胞，回輸或注射至病人體內(nèi)，從而達(dá)到阻止腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的目的。本發(fā)明操作步序如下：