[發明專利]一種腫瘤治療用外包體疫苗聯合DC-CIK新技術

無效

• 申請號: 201210116253.6
• 申請日: 2012-04-19
• 公開（公告）號: CN103372204A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發明（設計）人: 孫勇
• 申請（專利權）人: 孫勇
• 主分類號: A61K39/00
• 分類號: A61K39/00;A61K35/14;A61P35/00;C12N5/0783;C12N5/0784
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種腫瘤治療用外包體疫苗聯合DC-CIK新技術，其特征在于：

(1)DC細胞的制備，采集患者外周血并分離單個核細胞誘導分化成DC。

(2)外包體疫苗的制備，利用DC細胞培養的上清液離心獲得外包體。

(3)CIK細胞的制備，采集患者外周血并分離單個核細胞誘導分化成CIK。

(4)DC-CIK細胞制備，將制備的DC與CIK共培養以獲得DC-CIK。

(5)疫苗的接種和細胞移植，將外包體疫苗和DC-CIK分別注射和輸注給患者。

2.根據權利要求1所述的一種腫瘤治療用外包體疫苗聯合DC-CIK新技術，其特征是：(1)DC細胞的制備。利用血細胞分離機無菌條件下采集患者自體外周血單個核細胞，GMP100級條件下收集PBMC一半單核細胞于無血清培養基(含SCF、TPO、G-CSF、GM-CSF、IL-1、IL-3、甲基纖維素、Flt3-L)中培養2小時，除去上清液并加完全培養液，添加1000u/ml的rhGM-CSF和500u/ml的rhIL-4誘導DC，6天后添加IL-1b，IL-6和TNF-a促進DC成熟，培養的第7天收獲DC，質檢(細胞活力、細胞表型及形態)。

3.根據權利要求1所述的一種腫瘤治療用外包體疫苗聯合DC-CIK新技術，其特征是：(2)外包體疫苗的制備。收集外周血單個核細胞誘導的DC細胞培養的上清液，低速離心(1000轉/分鐘)去除懸浮細胞等，然后超速離心濃縮DC分泌的外包體，并進行質檢(檢測細菌、真菌、支原體、內毒素)。

4.根據權利要求1所述的一種腫瘤治療用外包體疫苗聯合DC-CIK新技術，其特征是：(3)CIK細胞的制備。在GMP100級條件下，收集PBMC單核細胞于無血清培養基培養2小時，其上清液經1200轉/分鐘離心后用完全培養基懸浮，并加入1000u/ml的IFN-r，培養24小時后加入50ng/ml的CD3單克隆抗體和500u/ml的rhIL-2，刺激CIK細胞的生長和增殖，第7天收集CIK細胞，用臺酚藍染色檢測細胞活力、流式細胞儀檢測細胞免疫表型(CD3⁺CD56⁺細胞應達到20％以上)。

5.根據權利要求1所述的一種腫瘤治療用外包體疫苗聯合DC-CIK新技術，其特征是：(4)DC-CIK細胞制備。收集培養第7天的DC細胞和CIK細胞，按照1∶10比例共培養，繼續培養7天。在培養結束前做無菌試驗；第14天收集細胞，臺酚藍染色檢測細胞活力、流式細胞儀檢測細胞免疫表型。

6.根據權利要求1所述的一種腫瘤治療用外包體疫苗聯合DC-CIK新技術，其特征是：(5)疫苗的接種和細胞移植。外包體疫苗分別在上肢的肩胛骨下淋巴結和下肢大腿內側淋巴結近處皮內注射，注射劑量為：1ml負載腫瘤抗原的DC源生外包體液注射在雙側上下肢的近端(腋窩和腹股溝淋巴結處)四個不同點(每個點0.25ml)，皮內注射。DC-CIK靜脈回輸，細胞數量為：3.0×107/kg/次。?