[發明專利]一株植物乳桿菌及其高密度培養和凍干菌粉制備的方法

無效

• 申請號: 201210115452.5
• 申請日: 2012-04-18
• 公開（公告）號: CN102864096A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發明（設計）人: 高鵬飛;姚國強
• 申請（專利權）人: 北京和美科盛生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12R1/25
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 李正清

技術領域

本發明涉及一株植物乳桿菌及其高密度培養和凍干菌粉制備的方法。?

背景技術

植物乳桿菌與人類的生活關系密切，是一種常見于奶油、肉類及許多蔬菜發酵制品中的乳酸菌，能通過胃并定植于腸道發揮有益作用。它對腸道微生物有重要影響，無論在食品發酵，還是在工業乳酸發酵以及醫療保健等領域，都有著廣泛的應用。?

本發明使用的植物乳桿菌P8是分離自內蒙古巴彥淖爾市烏拉特中旗傳統發酵乳制品(酸牛奶)中的一株益生菌，經16S?rDNA同源性分析與Gene?Bank中標準菌株植物乳桿菌ATCC14917的同源性為100％。植物乳桿菌P8作為一種益生菌，具備優良的益生特性，經研究表明該菌株具有良好的耐酸性、人工胃液、人工消化液耐受性、膽鹽耐受性、在腸道有凝集作用(自凝集和它凝集)及抑制常見腸道致病菌生長特性(Yan?Bao，Heping?Zhang等人，《Annals?of?Microbiology》)。含有益生菌植物乳桿菌P8的發酵乳可改善機體內的微生態環境、預防和治療高脂血癥。植物乳桿菌P8作為一種益生菌，在食品發酵、動物飼料及醫療保健等領域具有廣泛的應用前景和巨大經濟效益。?

高密度培養技術(High?Cell?Density?Culture)，也就是高密度發酵技術。由于各個菌種所能達到的最高菌體濃度相差較大，目前的文獻中并沒有對高密度培養有確切的定義。一般來說，高密度培養是指應用一定的培養技術或裝置提高菌體的發酵密度，使菌體密度較傳統培養方式有顯著的提高，從而達到減少培養體積，還可以縮短生產周期，最終提高特定產物的比生產速率，減少設備投資從而降低生產成本，提高在市場上的競爭力。?

隨著發酵劑的商業化生產和應用的迅速增加，工業發酵的基本目標自然轉向了以最小的代價獲得最大的產值和利潤，而實現這一目標的工程手段是針對每個特定過程建立相應的高效發酵模式。因此，進行工業化生產，大規模培養非遺傳修飾菌和工程菌的技術和工藝就顯得日趨重要。乳酸菌濃縮發酵劑制備的關鍵是要實現對其進行高活性、高密度的培養。?

植物乳桿菌可添加到食品基料中，制成能夠改善人體腸道健康的功能性食品，像瑞典Skanemejerier公司生產的含有L.plantarum?299v的ProVivarosehip飲料；也可制成調節腸道微生態平衡、提升免疫力的益生菌制劑，如加拿大生產的含L.planta?rum?R0202的益生菌制劑Jarrow?Formulas；還可用作豬飼料的益生素添加劑，?如用能夠耐受豬胃腸道轉運的L.plantarum?4.1。?

本發明針對一株從內蒙古傳統發酵乳制品-酸牛奶中分離，并經過體外耐酸性試驗、耐膽酸鹽試驗、降膽固醇試驗等一系列試驗篩選得到的具有潛在益生作用的植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum?P8)，通過優化液體培養基以及對培養條件的控制等方法實現高密度發酵，發酵液經離心收集菌體、添加保護劑后冷凍干燥得到凍干菌粉，可以應用于益生菌發酵劑和益生菌制劑。?

發明內容

本發明的目的在于提供一株植物乳桿菌及其高密度培養和凍干菌粉制備的方法。?

本發明的目的是通過如下技術方案實現的：?

一株植物乳桿菌，其特征在于：所述植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum?P8)是分離自內蒙古巴彥淖爾市烏拉特中旗傳統發酵乳制品(酸牛奶)中的一株益生菌，具有人工胃液和人工消化液耐受性、膽鹽耐受性、腸道凝集作用及抑制常見腸道致病菌等特性；該菌菌株已于2011年11月18日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所，分類命名：植物乳桿菌Lactobacillus?plantarum，保藏號為CGMCC?No.5468。?

一種如上所述的植物乳桿菌的高菌體密度培養的方法，包括以下步驟：?

a.菌種的活化：?

將冷凍保存的植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum?P8)接種于MRS液體培養基中，37℃培養18～24小時，如此傳代培養1～2次得到活化菌種；?

b.優化培養基的配制：?

將優化培養基各成份按比例配制，混合均勻后調pH值為6.5，121℃下滅菌15min；?

優化培養基各成分的含量比例如下：?