[發明專利]一株植物乳桿菌及其高密度培養和凍干菌粉制備的方法

無效

• 申請號: 201210115452.5
• 申請日: 2012-04-18
• 公開（公告）號: CN102864096A
• 公開（公告）日: 2013-01-09
• 發明（設計）人: 高鵬飛;姚國強
• 申請（專利權）人: 北京和美科盛生物技術有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/04;C12R1/25
• 代理公司: 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129
• 代理人: 李正清

1.一株植物乳桿菌，其特征在于：所述植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum?P8)是分離自內蒙古巴彥淖爾市烏拉特中旗傳統發酵乳制品中的一株益生菌，具有人工胃液和人工消化液耐受性、膽鹽耐受性、腸道凝集作用及抑制常見腸道致病菌等特性；該菌菌株已于2011年11月18日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌種保藏中心保藏，保藏號為CGMCC?No.5468。

2.一種如權利要求1所述的植物乳桿菌的高密度培養方法，其特征在于依次包括下述步驟：

a.菌種的活化：

將冷凍保存的植物乳桿菌(Lactobacillus?plantarum?P8)接種于MRS液體培養基中，37℃培養18～24小時，如此傳代培養1～2次得到活化菌種；

b.培養基的配制：

將優化培養基各成份按比例配制，混合均勻后，然后調pH值為6.5，121℃下滅菌15min；

c.種子發酵液的制備：

取步驟a中活化好的菌種接種于b中配制的培養基中，37℃培養8～10小時；

d.接種與培養：

將步驟c的種子發酵液，接種于b中配制的培養基中，在控制的發酵條件下發酵8～15h；

e.終止發酵

當菌體產酸停止時終止發酵，得到植物乳桿菌的高密度發酵液。

3.一種如權利要求1所述的植物乳桿菌的凍干菌粉的制備方法，其特征在于依次包括以下步驟：

a.菌體濃縮：高密度發酵液經5000～12000g離心濃縮菌體；

b.添加保護劑：菌體濃縮液添加5～10倍的保護劑溶液；

c.干燥：將上述添加保護劑后的菌懸液經冷凍干燥得到凍干菌粉。

4.根據權利要求2所述的植物乳桿菌的高密度培養方法，其特征在于b步驟和e步驟中優化培養基各成分的含量比例如下：

蔗糖50～80kg，酵母粉20～40kg，大豆蛋白胨8～20kg，檸檬酸1～1.5kg，檸檬酸鈉20～25kg，MgSO₄.7H₂O?1.5～2.0kg，MnSO₄.5H₂O?0.08～0.12kg，吐溫-80?0.8～1.0kg，蒸餾水1000L。

5.根據權利要求2所述的植物乳桿菌的高密度培養方法，其特征在于d?步驟中控制的發酵條件為：35～37℃恒溫培養，通過流加中和劑的方法控制發酵過程pH保持恒定，保持微通氧或厭氧發酵。

6.根據權利要求2所述的植物乳桿菌的高密度培養方法，其特征在于e步驟中可根據pH不再降低，中和劑流加停止來判斷是否到達發酵終點。

7.根據根據權利要求3所述的方法，其特征在于b步驟中保護劑的各成分的含量比例如下：脫脂乳30～35kg，脫鹽乳清粉15～20kg，工業海藻糖15～20kg，維生素C?3～4kg，卵磷脂0.05～0.08kg，蒸餾水1000L。

8.根據權利要求5所述植物乳桿菌的高密度培養方法，其特征在于中和劑可以選擇NaOH、KOH、Na₂CO3等無機堿水溶液或氨水溶液。

9.根據權利要求5所述植物乳桿菌的高密度培養方法，其特征在于pH保持微酸性，5.6-6.2之間。

10.根據權利要求5所述的植物乳桿菌的高密度培養方法，其特征在于微通氧條件通過通空氣0.02～0.05vvm或每兩個小時通空氣一次的方法實現；厭氧條件通過通氮氣0.02～0.05vvm或每兩個小時通氮氣一次的方法實現。?