[發明專利]一種微陣列透析室及利用該透析室的富集培養方法

有效

• 申請號: 201210115403.1
• 申請日: 2012-04-18
• 公開（公告）號: CN102634447A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 楊季芳;熊尚凌;陳吉剛
• 申請（專利權）人: 浙江萬里學院
• 主分類號: C12M1/12
• 分類號: C12M1/12;C12N1/00;C12Q1/68;C12Q1/06
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 張一平

技術領域

本發明涉及微生物培養裝置及微生物培養方法，具體是指一種微陣列透析室及利用該透析室的富集培養方法。

背景技術

海洋微生物分布廣、數量多，在海洋生態系統中起著特殊的作用，海洋環境中99％以上的微生物無法通過常規分離培養獲得，一旦離開原環境都無法生長。已有研究表明，這些“非可培養微生物”在生態環境和地球能量及物質循環中起到了舉足輕重的作用，因此，研究開發“非可培養微生物”的培養方法和技術一直以來都是微生物學研究的熱點。

目前，研究人員已經開展了原位分離“非可培養微生物”技術的研究，其中，透析室培養技術為其主要的培養技術之一，相應地，也出現了多種透析室培養裝置。如專利號為ZL?200620120442.0(授權公告號為CN?2937146Y)的中國實用新型專利所公開的《一種雙向透析器》，該透析器用不銹鋼制成，形狀為長方形，其特征是由三個部分組成，其中，左、右側室為培養基貯存室，中間室為細菌培養室，左右兩室與中間室用透析模隔開。該雙向透析器通過雙向透析擴大了透析面，從而在培養基中的營養物質得以充分利用，但是，該雙向透析器不適合用于原位環境培養，因為該雙向透析器中的培養基貯存室處于相對封閉狀態，在培養過程中，位于培養基貯存室內的營養物質會逐漸減少，培養效率必定會受影響。作為對這種相對封閉的透析室的改進，人們發明了不少能適合于原位環境培養的開放式的透析室裝置，但是這些透析室裝置都只有一個單一的透析室，使得一次只能培養一份樣品，培養效率較低。而且，這些透析室的直徑一般均為厘米級，透析室體積較大，在一個透析室內植入的菌株數量較多，這些植入同一透析室的菌株一般包括有不同優勢等級的菌種，在培養過程中，透析室內不同優勢等級的菌種之間經過優勝劣汰，其中的優勢菌種得以生存并培養出來，其中的次優勢菌種及非優勢菌種因生長受到抑制而難以培養出來，即難以獲得次優勢菌種及非優勢菌種的單克隆培養。此外，由于透析室內菌株數量較多，在一次培養過程中，培養出來的優勢菌種往往也分好幾種，從而還必須經過后續的分離操作將這些優勢菌種分離開來，操作較為繁瑣。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是針對上述現有技術現狀，提供一種培養通量較高并能獲得近似單克隆培養的微陣列透析室。

本發明所要解決的又一個技術問題是提供一種能確定樣品的最佳稀釋培養濃度和能得出不同稀釋培養濃度下微生物的多樣化差異的富集培養方法。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：該微陣列透析室，其特征在于：包括上蓋板、下蓋板及夾設固定在上、下蓋板之間的中心板，在所述上、下蓋板及中心板上分別設有上下嚴格對齊的微孔陣列，在上蓋板的微孔陣列與中心板的微孔陣列之間夾設有第一微孔濾膜，在下蓋板的微孔陣列與中心板的微孔陣列之間夾設有第二微孔濾膜，所述中心板的微孔陣列中的各微孔被所述的第一微孔濾膜和第二微孔濾膜隔離成獨立的透析室。

進一步優選，所述微孔陣列中各微孔的孔徑為1～2mm。當然，微孔陣列中微孔的孔徑可以根據實驗不同作相應調整，只要使中心板的每個微孔內能植入適量的菌株數量進行培養。

進一步優選，所述的上、下蓋板及中心板均為長方形，在上、下蓋板及中心板上沿各自長度方向分別設有兩個所述的微孔陣列，且所述的微孔陣列為圓形，對應地，所述的第一微孔濾膜和第二微孔濾膜也均為圓形。這樣，整個裝置結構較為簡單，同時也便于采用標準化的微孔濾膜。

作為上述方案的改進，所述微孔陣列的直徑為25mm，所述第一微孔濾膜中各微孔的孔徑及所述第二微孔濾膜中各微孔的孔徑均為0.1μm。其中，微孔濾膜的微孔孔徑可以根據實驗不同作相應調整，但需保證已植入透析室的待培養菌株和位于透析室外的菌株均不能透過微孔濾膜，并同時使小分子營養物質能透過微孔濾膜而自由出入透析室。

作為上述方案的進一步改進，在所述上蓋板的上表面及下蓋板的下表面均開有圓形凹槽，所述上、下蓋板上的微孔陣列分別成型于各自所在蓋板的圓形凹槽的底部。設置凹槽后，上、下蓋板的整體厚度可以增加，從而提高裝置結構強度。

為了進一步提高結構強度，所述的上、下蓋板及中心板均采用聚甲醛板。

一種利用上述透析室的富集培養方法，其特征在于包括如下步驟：

(一)、將樣品按不同濃度梯度稀釋后分別與一培養基充分混合并分別接種于所述透析室內，之后對不同濃度梯度稀釋下的樣品分別進行原位培養和模擬原位培養；