[發明專利]一種微陣列透析室及利用該透析室的富集培養方法

有效

• 申請號: 201210115403.1
• 申請日: 2012-04-18
• 公開（公告）號: CN102634447A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 楊季芳;熊尚凌;陳吉剛
• 申請（專利權）人: 浙江萬里學院
• 主分類號: C12M1/12
• 分類號: C12M1/12;C12N1/00;C12Q1/68;C12Q1/06
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 張一平

1.一種微陣列透析室，其特征在于：包括上蓋板(1)、下蓋板(2)及夾設固定在上、下蓋板之間的中心板(3)，在所述上、下蓋板(1、2)及中心板(3)上分別設有上下嚴格對齊的微孔陣列(4)，在上蓋板(1)的微孔陣列與中心板(3)的微孔陣列之間夾設有第一微孔濾膜(51)，在下蓋板(2)的微孔陣列與中心板(3)的微孔陣列之間夾設有第二微孔濾膜(52)，所述中心板(3)的微孔陣列中的各微孔被所述的第一微孔濾膜(51)和第二微孔濾膜(52)隔離成獨立的透析室。

2.根據權利要求1所述的微陣列透析室，其特征在于：所述微孔陣列(4)中各微孔的孔徑為1～2mm。

3.根據權利要求1或2所述的微陣列透析室，其特征在于：所述的上、下蓋板(1、2)及中心板(3)均為長方形，在上、下蓋板(1、2)及中心板(3)上沿各自長度方向分別設有兩個所述的微孔陣列(4)，且所述的微孔陣列(4)為圓形，對應地，所述的第一微孔濾膜(51)和第二微孔濾膜(52)也均為圓形。

4.根據權利要求3所述的微陣列透析室，其特征在于：所述微孔陣列(4)的直徑為25mm，所述第一微孔濾膜(51)中各微孔的孔徑及所述第二微孔濾膜(52)中各微孔的孔徑均為0.1μm。

5.根據權利要求1或2所述的微陣列透析室，其特征在于：在所述上蓋板(1)的上表面及下蓋板(2)的下表面均開有圓形凹槽(6)，所述上、下蓋板(1、2)上的微孔陣列(4)分別成型于各自所在蓋板的圓形凹槽(6)的底部。

6.根據權利要求1或2所述的微陣列透析室，其特征在于：所述的上、下蓋板(1、2)及中心板(3)均采用聚甲醛板。

7.一種利用權利要求1所述的透析室的富集培養方法，其特征在于包括如下步驟：

(一)、將樣品按不同濃度梯度稀釋后分別與一培養基充分混合并分別接種于所述透析室內，之后對不同濃度梯度稀釋下的樣品分別進行原位培養和模擬原位培養；

(二)、獲取上述經原位培養和模擬原位培養后的樣品，并分別溶解于滅菌生理鹽水以制成原位培養下的原濃度菌液和模擬原位培養下的原濃度菌液，再將上述兩原濃度菌液分別進行平板涂布培養；

(三)、結合稀釋平板計數法和DAPI熒光染色計數法，分別計算在原位培養下和在模擬原位培養下所述透析室對應不同濃度梯度時的可培養率，并采用DGGE凝膠電泳檢測技術分別分析樣品在原位培養和模擬原位培養下對應不同濃度梯度稀釋時的微生物多樣化差別。

8.根據權利要求7所述的富集培養方法，其特征在于根據步驟(三)的可培養率求得最佳稀釋培養濃度，并分析不同培養基在上述最佳稀釋培養濃度下的可培養率和微生物多樣性。

9.根據權利要求7或8所述的富集培養方法，其特征在于步驟(三)中所述的DGGE凝膠電泳檢測包括如下三個步驟：

①、采用化學裂解法與酶溶法相結合提取DNA；

②、將DNA模板稀釋50倍后取0.2μL對16S?rDNAV3-V5區序列進行PCR擴增；

③、對PCR產物進行DGGE電泳檢測。

10.根據權利要求7所述的富集培養方法，其特征在于所述菌株的培養基為LB固體培養基，該LB固體培養基包括有0.7％瓊脂、0.5％酵母提取物、1％胰蛋白胨及1％氯化鈉。