[發明專利]一種長白山牛皮杜鵑基因組DNA提取的方法

有效

• 申請號: 201210113210.2
• 申請日: 2012-04-18
• 公開（公告）號: CN103074326A
• 公開（公告）日: 2013-05-01
• 發明（設計）人: 徐洪偉;周曉馥;未曉巍
• 申請（專利權）人: 吉林師范大學
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 吉林省長春市新時代專利商標代理有限公司 22204
• 代理人: 石岱

1.一種長白山牛皮杜鵑基因組DNA提取的方法，其特征在于：該方法采用CTAB法與SDS法相結合，即首先采用CTAB法提取牛皮杜鵑基因組DNA，然后再采用SDS法純化所提取的基因組DNA。

2.一種長白山牛皮杜鵑基因組DNA提取的方法，其特征在于：該方法的具體步驟如下：

（1）、CTAB法提取牛皮杜鵑基因組DNA：

向提取容器內加入CTAB提取緩沖液預熱至65?℃；將牛皮杜鵑新鮮葉片在研磨前加入?-巰基乙醇,?加入量為CTAB提取緩沖液體積的4.3%V/V，經液氮研磨成凍粉狀后迅速加入到上述預熱的CTAB提取緩沖液中，充分混勻；于?65?℃溫浴4小時；然后按常規方法提取出牛皮杜鵑基因組DNA；??

（2）、結合SDS法純化所提取的基因組DNA：

向上述提取出的牛皮杜鵑基因組DNA溶液中加入1/10體積2%的SDS，冰浴10?分鐘；加入1/10體積5?mol·L^-1?KAc，冰浴30?分鐘；18?℃下12,000?rpm離心10?分鐘，取上清液；加入1/20體積2%?的?SDS，冰浴10?分鐘；加入1/20體積5?mol·L^-1?KAc，冰浴30?分鐘；離心，取上清液；酚氯仿抽提一次，取上清液；醇沉，洗滌沉淀，溶解沉淀即為純化的牛皮杜鵑基因組DNA。

3.根據權利要求2所述的一種長白山牛皮杜鵑基因組DNA提取的方法，其特征在于：該方法的具體步驟如下：

?（1）、?CTAB法提取牛皮杜鵑基因組DNA：

取2.0?ml離心管，加入700?ul的CTAB提取緩沖液，65?℃預熱；?取新鮮幼嫩牛皮杜鵑材料0.3?g，研磨前加入30?ul??-巰基乙醇，液氮中研磨成凍粉末狀并迅速將該凍粉轉入上述離心管中，充分混勻；水浴中65?℃溫浴4小時；然后按常規方法提取出牛皮杜鵑基因組DNA；

?（2）、結合SDS法純化所提取的基因組：

向上述提取出的牛皮杜鵑基因組DNA溶液中加入1/10體積2%的SDS，冰浴10?分鐘；加入1/10體積5?mol·L^-1?KAc，冰浴30?分鐘；18?℃下12,000?rpm離心10?分鐘，取上清液；加入1/20體積2%?的?SDS，冰浴10?分鐘；加入1/20體積5?mol·L^-1?KAc，冰浴30?分鐘；離心，取上清液；酚氯仿抽提一次，取上清液；醇沉，洗滌沉淀，溶解沉淀即為純化的牛皮杜鵑基因組DNA。

4.根據權利要求2或3所述的牛皮杜鵑基因組DNA提取的方法，其特征在于：所述的CTAB提取緩沖液是由：2%?CTAB，100?mmol·L^-1?Tris-HCl?pH?8.0,?20mmol·L^-1?EDTA，1.4?mol·L^-1?NaCl，4%?PVP組成；所述的酚氯仿是苯酚與氯仿按1：1體積比配制而成。