[發明專利]龍腦樟規模化繁殖的生產方法

有效

• 申請號: 201210113023.4
• 申請日: 2012-04-17
• 公開（公告）號: CN102630459A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發明（設計）人: 葉清梅;李雪;張天進;黃雨花;陳艷紅;陳柳紅;楊雙霞
• 申請（專利權）人: 泉州市泉美生物科技有限公司
• 主分類號: A01G1/00
• 分類號: A01G1/00;A01H4/00
• 代理公司: 泉州市文華專利代理有限公司 35205
• 代理人: 車世偉

1.一種龍腦樟規模化繁殖的生產方法，其特征在于包括如下步驟：

步驟1、母株選擇、外植體培育與預處理：

在春季，選擇優良、健壯、無病蟲害、經測定藥效成份穩定且右旋龍腦含量高的多年生龍腦樟為原種，從該龍腦樟原種上截取一年生的枝條作為扦插母本，在該扦插母本上剪取半木質化或已木質化枝條作為插穗，每個插穗帶1～2個節，經過無菌處理后扦插到基質中；待插穗成活，其根系完整、新芽長出且有新葉抽后，移到盆/缽中放置溫室進行常規扦插苗養護；當插穗的腋芽抽起10～15cm、枝條未木質化時，即可采集作為外植體，每個外植體長度約1～2.5cm；在采集外植體前需對插穗停止澆水、澆肥2～5天，待基質表面干燥或發白即可；

步驟2、無菌材料獲得：

將采集好的外植體切去截面變色部分，接種于經滅菌好的4/5改良MS培養基中，培養條件為：溫度25±1.5℃，光照時間14±2H/D，光照強度3.75-6.25μmol·m^-2·s^-1，培養周期4～5周；

所述的改良MS培養基指的是，將習知的MS中的CaCl₂.2H₂O?440mg.L^-1改為等量的Ca(NO₃)₂.4H₂O，再添加檸檬酸50mg·L^-1、6-BA??2.0-6.0mg·L^-1、NAA?0.1-0.5mg·L^-1、蔗糖30g·L^-1、卡拉膠5.5g·L^-1、pH?5.7；

步驟3、無菌材料的馴化與繼代擴繁：

第一代無菌材料培養后，當頂芽抽出或莖段抽起長度大于20mm時，以1～2節為單位進行切割；當有側芽分化時，以2～4芽團進行方向性切割，將切割好的芽團接種于經滅菌好的3/4改良MS培養基中，培養條件為：溫度26±2℃，光照時間14±2H/D，光照強度18.75-22.5μmol·m^-2·s^-1，培養周期4～6周；

所述的改良MS培養基指的是，將習知的MS中的CaCl₂.2H₂O?440mg.L^-1改為等量的Ca(NO₃)₂.4H₂O，再添加檸檬酸50mg·L^-1、6-BA??2.0-3.0mg·L^-1、NAA?0.1-0.5mg·L^-1、蔗糖30g·L^-1、卡拉膠5.5g·L^-1、pH?5.7；

經上述2～3次轉代培養后即完成馴化，進入擴繁階段：進入擴繁階段的芽繼代材料為12-20個芽/團，繼代時，按3-4芽/團切割，當芽叢上的枝條高于20mm時，保留下方1-2節去頂后，接種于3/4MS改良培養基中，擴繁系數為3.5-5.5；

所述的改良MS培養基指的是，將習知的MS中的CaCl₂.2H₂O?440mg.L^-1改為等量的Ca(NO₃)₂.4H₂O，再添加檸檬酸50mg·L^-1、6-BA??1.0-3.0mg·L^-1、NAA?0.1-0.5mg·L^-1、蔗糖30g·L^-1、卡拉膠5.5g·L^-1、pH?5.7；

步驟4、壯苗生根培養

將經擴繁培養后的芽團按2-4芽/團方向性切割后，接種到壯苗培養基中，培養條件為：溫度26±1℃，光照時間14±2H/D，光照強度31.25-37.5μmol·m^-2·s^-1，培養周期5～7周；

該壯苗培養基為3/4改良MS培養基，在習知的MS培養基中添加檸檬酸50mg·L^-1，6-BA??0.01-0.5mg·L^-1、NAA??0.1-0.3mg·L^-1、活性炭300-500mg·L^-1、蔗糖25g·L^-1、卡拉膠6.0g·L^-1、pH?5.7；

當壯苗培養后團塊上的芽達到20-35mm、具有兩片完整葉且葉片平展時，切下來接種到生根培養基中，培養條件為：溫度25±1℃，光照時間14±2D，光照強度31.25-45.5μmol·m^-2·s^-1；

該生根培養基為1/4改良MS培養基，在習知的MS培養基中添加檸檬酸50mg·L^-1，IBA?1-3mg·L^-1、NAA?0.2-0.5mg·L^-1、活性炭300-500mg·L^-1、蔗糖25g·L^-1、卡拉膠7.0g·L^-1、pH?5.7；

選擇根數3～6條，植株高度達40～65mm以上，具有4片完整葉，長勢健壯的作為生根苗；

步驟5、溫室種植

將生根苗移至溫室進行煉苗7-10天后取出，將其根部的培養基清洗干凈，無菌處理后種植至基質中，種植2-3個月即可。