[發(fā)明專利]鑒定雞傳染性支氣管炎病毒流行株與疫苗株的RT-PCR法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210112760.2
• 申請日: 2012-04-17
• 公開（公告）號: CN102643931A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發(fā)明（設計）人: 張國中;唐娜;龔一;秦秀慧
• 申請（專利權）人: 中國農業(yè)大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王朋飛;王加嶺

1.鑒定雞傳染性支氣管炎病毒流行株與疫苗株的引物組合，其特征在于，其包括：

上游引物P1：5’-GACCACAGTCACGCACAA-3’；

下游引物P2：5’-AATCTCCTCGGGTTCATC-3’；

下游引物P3：5’-AACTACACTCAACAATGGA-3’；以及

下游引物P4：5’-CCTGATTCTTCTTGATAC-3’。

2.含有權利要求1所述引物組合的用于鑒定雞傳染性支氣管炎病毒流行株與疫苗株的試劑盒。

3.根據(jù)權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括隨機引物、反應緩沖液、dNTPs、Rnase抑制劑、反轉錄酶、PCR?Taq?mix、DEPC處理水中的一種或多種。

4.根據(jù)權利要求2或3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性標準模板。

5.鑒定雞傳染性支氣管炎病毒流行株與疫苗株的RT-PCR法，其特征在于，包括以下步驟：

1)樣本總RNA的提取；

2)反轉錄得到樣本cDNA；

3)以樣本cDNA為模板，使用權利要求1的引物組合進行PCR擴增；

4)分析PCR擴增產物，結果判定。

6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟3)中PCR反應體系以20μl計為：

PCR反應條件為：95℃?5min；94℃?45s，52.5℃?45s，71℃?60s，共30個循環(huán)；71℃?10min。

7.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟2)中反轉錄生成cDNA的方法為：

在0.2ml離心管內加入下列成分：

RNA溶液????????????????????????6μl

500μg/ml隨機引物??????????????1μl

混勻，70℃水浴5min，冰浴2min；

然后向上述離心管中加入下列成分：

混勻，將上述反應體系置于37℃?1h，95℃?5min，得到樣本cDNA。