[發(fā)明專(zhuān)利]一種基于電化學(xué)hairpin DNA生物傳感器的9-羥基芴測(cè)定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210111457.0
• 申請(qǐng)日: 2012-04-17
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102680549A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-09-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉新會(huì);梁剛;李曉宏;鞏文雯;劉冠男;陶莉
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 北京師范大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N27/327
• 分類(lèi)號(hào): G01N27/327;G01N27/26
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• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種hairpin?DNA修飾的金電極的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)電極的預(yù)處理與活化：

將金電極在鹿皮拋光布上用0.05μm的α-Al₂O₃粉末拋光至鏡面，拋光后先洗去表面污物，并依次在乙醇和去離子水中超聲清洗，每次2～3min，重復(fù)三次；然后在0.5mol/L?H₂SO₄溶液中經(jīng)循環(huán)伏安掃描至穩(wěn)定，最后用去離子水沖洗干凈，氮?dú)獯蹈桑玫奖砻娓蓛舻慕痣姌O；

2)Hairpin?DNA溶液的配制：

將固體hairpin?DNA藥品用pH＝7.4的高離子強(qiáng)度Tris-NaClO₄緩沖溶液溶解并稀釋到一定濃度，并用漩渦振蕩器混勻，于室溫下靜置12h以備用；

3)Hairpin?DNA修飾電極的制備：

將上述步驟1)活化處理的金電極浸泡在上述步驟2)配制的hairpin?DNA溶液中，于室溫下靜置4-5天，其中巰基修飾的hairpin?DNA通過(guò)Au-S鍵作用自組裝于金電極表面從而得到hairpin?DNA修飾電極。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的hairpin?DNA修飾的金電極的制備方法，其特征在于：所述Tris-NaClO₄緩沖溶液中Tris濃度為20mM，NaClO₄濃度為300mM。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的制備方法，其特征在于：所述的hairpin?DNA為5′端雙巰基修飾的含40個(gè)堿基的hairpin?DNA序列，其中共包含三部分：hairpin?DNA序列靠近5′端的前9個(gè)堿基胸腺嘧啶為柔性間隔基團(tuán)，用以保持hairpin結(jié)構(gòu)的雙鏈部分及hairpin?DNA結(jié)構(gòu)的“環(huán)”狀部分。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述的hairpin?DNA的“環(huán)”部分堿基為富含鳥(niǎo)嘌呤和胞嘧啶堿基序列。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：hairpin?DNA用以保持hairpin結(jié)構(gòu)的雙鏈部分堿基數(shù)為5對(duì)。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述hairpin?DNA的濃度為5μM，體積為70～90μL。

7.一種應(yīng)用如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述制備方法得到的hairpin?DNA修飾電極對(duì)羥基芴檢測(cè)的方法，其特征在于具體步驟為：將上述制備的hairpin?DNA修飾的金電極為工作電極，以飽和KCl溶液中的Ag/AgC為參比電極，鉑電極為對(duì)電極構(gòu)筑三電極體系，先將hairpinDNA修飾電極在2mMK₃[Fe(CN)₆]/K₄[Fe(CN)₆]溶液中進(jìn)行電化學(xué)阻抗測(cè)量，測(cè)完后用緩沖溶液淋洗，然后置于以pH值為7.4的0.02mol/L的Tris-NaClO₄緩沖溶液配制的一定濃度的9-羥基芴溶液中，反應(yīng)30min，然后再進(jìn)行電化學(xué)阻抗測(cè)定，比較作用前后阻抗值的變化。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測(cè)方法，其特征在于：羥基芴為9-羥基芴。