[發(fā)明專利]一種制備單一植物甾醇氧化物的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210110446.0
• 申請日: 2012-04-16
• 公開（公告）號: CN102633854A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張欣;岳秋林;高俊蘭;程備久
• 申請（專利權(quán)）人: 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07J9/00
• 分類號: C07J9/00;C07J75/00
• 代理公司: 江蘇銀創(chuàng)律師事務(wù)所 32242
• 代理人: 何震花

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及有機化工或者精細(xì)化工領(lǐng)域，具體涉及一種制備單一植物甾醇氧化物的方法。

背景技術(shù)

植物甾醇是一類存在于植物中的結(jié)構(gòu)相似但種類繁多的天然活性物質(zhì)的統(tǒng)稱，現(xiàn)已確認(rèn)了40多種植物甾醇，主要包括谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇等。他們是以環(huán)戊烷全氫菲為主體骨架（甾核）的甾體化合物，在結(jié)構(gòu)上與膽固醇相似。近年來，由于發(fā)現(xiàn)植物甾醇具有很好的降低膽固醇的功效，可使人們免遭動脈粥樣硬化等疾病的侵害，因此作為功能食品的重要添加劑而備受青睞，并已取得越來越廣泛的應(yīng)用。研究表明，每日1.5～3克植物甾醇的攝入量可以將血清中膽固醇含量降低10～15%。

有關(guān)膽固醇及其氧化物的研究目前已較為透徹。在加熱、光照以及酶催化等條件下，膽固醇會相應(yīng)經(jīng)歷熱氧化、光氧化以及酶氧化，從而轉(zhuǎn)變成多種結(jié)構(gòu)的膽固醇氧化物。而隨著膽固醇氧化物在體內(nèi)的積累，隨之而來的是基因突變、動脈粥樣硬化、細(xì)胞壞死等疾病，給很多人造成了困擾。同樣，作為膽固醇同源物的植物甾醇，由于它們在結(jié)構(gòu)上的相似性（只在側(cè)鏈上有差異），它是否也會發(fā)生相似的化學(xué)反應(yīng)，比如氧化，相應(yīng)的植物甾醇氧化物又會對生物體造成怎樣的影響，會不會和膽固醇氧化物具有類似的毒性。有關(guān)這些問題都亟須解答，而這些方面的研究依然有限。

我國對甾醇類物質(zhì)的研究只停留在對總植物甾醇的提取和分析方面，對于甾醇氧化物的研究鮮有報道。國外關(guān)于甾醇氧化物的研究多涉及在食物中的定性定量分析，對其生物活性的研究也處于初級階段。隨著國內(nèi)外對食品安全的日益關(guān)注以及植物甾醇作為食品添加劑的大量應(yīng)用，植物甾醇氧化物的安全性同時也越來越引起人們的注意，作為研究和生產(chǎn)用的高純度植物甾醇氧化物的需求量大幅上升。然而，目前尚無任何市售的植物甾醇氧化物標(biāo)準(zhǔn)品。

化學(xué)合成法是獲得甾醇氧化物最為傳統(tǒng)的方法?？紤]到反應(yīng)轉(zhuǎn)化率的問題，每一種氧化物的合成通常需要不少于1～3克的植物甾醇單體作為反應(yīng)起始物。但目前市售多為甾醇混合物，甾醇單體僅有2～3種且價格非常昂貴，難以實現(xiàn)對不同氧化物的合成制備。如何獲得甾醇氧化物，尤其是單一甾醇氧化物，并提高其純度和收率，是當(dāng)今植物甾醇氧化物分離精制研究的熱點。

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發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種制備單一植物甾醇氧化物的方法，首先采用高溫加熱植物甾醇原料，生成多種甾醇氧化物，再經(jīng)柱色譜和液相色譜的連續(xù)分離制備，可以快速同時獲得多種不同結(jié)構(gòu)的高純度植物甾醇氧化物。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

一種制備單一植物甾醇氧化物的方法，按照下述步驟進行：

①?將混合植物甾醇在高溫180～220℃條件下加熱10～15小時，自然冷卻后回收所有物質(zhì)；

②?將回收液在50～60℃下減壓濃縮到原體積的1/10；

③?將②物質(zhì)上樣硅膠柱色譜，梯度洗脫，分離未被氧化的甾醇和氧化了的甾醇；

④?回收各組相同餾分并分別過濾，去除未被氧化的甾醇，減壓條件下蒸干洗提液，并用氮氣吹干，得甾醇氧化物的粗混合物；

⑤?將步驟④得到的甾醇氧化物的粗混合物溶解于乙腈中，進樣入制備型高效液相色譜；用流動相進行洗脫，對混合甾醇氧化物中的各化合物實現(xiàn)基線分離；多次循環(huán)進樣，分別回收相同組分的單峰物質(zhì)于相應(yīng)回收瓶中；

⑥?50～60℃下減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除各組分中的溶劑，氮氣吹干，得最終產(chǎn)品。

所述步驟①中混合植物甾醇含谷甾醇、菜油甾醇、豆甾醇和燕麥甾醇。

所述步驟①中將已熱氧化的甾醇經(jīng)自然冷卻后，用質(zhì)量體積比m/V＝1∶10的氯仿或乙酸乙酯回收。

所述步驟③中在硅膠柱色譜中梯度洗脫的洗脫液為體積比為3:1～1:3的正己烷和乙酸乙酯的混合液，或體積比為3:1～1:3的石油醚和乙酸乙酯的混合液，

所述步驟⑤中將上述混合氧化物以質(zhì)量體積比1：0.5～1：2毫克/毫升溶解于乙腈（視其在乙腈中的溶解度而定），每次色譜進樣量1～2毫升。

所述步驟⑤中所述的高效液相的色譜柱，為制備型C18高效液相色譜柱；

所述步驟⑤中液相色譜的流動相為乙腈和異丙醇的混合試劑，二者的體積比為60～95：40～5；或為乙腈、異丙醇和水的混合試劑，三者之間的體積比為60～80：38～15：2～5；流速為1～2?mL/min，紫外檢測波長為206～210?nm，每個循環(huán)的保留時間為30～45分鐘。