[發(fā)明專利]一種組織工程化軟骨移植物的制備方法及產(chǎn)品

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210110340.0
• 申請日: 2012-04-13
• 公開（公告）號: CN103372233A
• 公開（公告）日: 2013-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫冬梅;楊丹;吳明皇;柴勛
• 申請（專利權(quán)）人: 杭州龍禧生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: A61L27/48
• 分類號: A61L27/48;A61L27/38
• 代理公司: 杭州新源專利事務(wù)所(普通合伙) 33234
• 代理人: 李大剛

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種組織工程化軟骨移植物的制備方法及產(chǎn)品，屬于藥品的技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

關(guān)節(jié)軟骨屬于透明軟骨，自身沒有血液供應(yīng)，無淋巴引流，無神經(jīng)分布，軟骨細胞是高度分化的組織細胞，成熟的關(guān)節(jié)軟骨細胞的分裂能力有限，因此，人體的軟骨一旦受到損傷，無法自行愈合。其中關(guān)節(jié)軟骨損傷的治療一直是困擾骨科基礎(chǔ)研究與臨床治療的棘手問題。我國骨關(guān)節(jié)炎發(fā)病率為3％，每年有近千萬的新增軟骨損傷病人，且隨著社會的現(xiàn)代化進城和人口的老齡化，由外傷和退變引起的關(guān)節(jié)軟骨損傷患者逐漸增多，為此，如何解決關(guān)節(jié)軟骨修復的問題日益顯得重要。

目前臨床治療關(guān)節(jié)軟骨損傷的方法有藥物治療、關(guān)節(jié)腔沖洗、骨髓刺激等，其中藥物治療的效果不顯著；關(guān)節(jié)腔沖洗和骨髓刺激的處理方式效果顯著，但只能維持1至2年。以上治療方法效果有限且不能持續(xù)的根本原因是這些方法不能進行關(guān)節(jié)軟骨缺損修復、阻止疾病的進一步發(fā)展。組織工程化軟骨移植技術(shù)作為組織再生科學應(yīng)用于治療軟骨缺損的一項技術(shù)，具有組織功能再生優(yōu)勢，能有效地阻斷病變，恢復關(guān)節(jié)功能。而在組織工程化軟骨移植技術(shù)中，軟骨移植物的制備尤其重要，其直接影響軟骨缺損部位的修復效果。且現(xiàn)有的制備方法原料成本高、工藝復雜，不易操作，制備成本高，每平方厘米1500元左右。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于：提供一種組織工程化軟骨移植物的制備方法及產(chǎn)品。本發(fā)明的制備方法原料成本低、工藝簡單、易操作、制備成本可大幅降低。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：

一種組織工程化軟骨移植物的制備方法，所述方法為：采用冷凍-凍干法將PLGA絲線編織網(wǎng)，整合-到膠原-殼聚糖支架中，形成PLGA編織網(wǎng)/膠原-殼聚糖復合支架；將濃度大于1x10⁷個/ml的軟骨細胞添加到纖維蛋白凝膠中并充分混勻細胞，將細胞-纖維蛋白混合液接種于上述支架中，形成組織工程移植物。

前述的組織工程化軟骨移植物的制備方法為：先用編織機將PLGA絲線編織成網(wǎng)，用丙酮清洗1-3次，去離子水清洗2-5次，每次10-50min；然后在真空30-60℃下干燥20-50h，80-120℃下?lián)畏ㄐ?0-45h，得到厚度為0.5-1.0mm，相對孔徑為250-350μm的PLGA編織網(wǎng)；將上述PLGA編織網(wǎng)裁剪成邊長為2-5cm的正方形并置于模具中，注入膠原-殼聚糖混合溶液0.5-3ml/m²，經(jīng)過零下90-120℃冷凍-凍干處理10-36h，待溶劑完全升華后即獲得厚度為0.1-0.3cm的PLGA編織網(wǎng)/膠原-殼聚糖復合支架；將濃度＞1x10⁷個/ml的軟骨細胞經(jīng)0.1-0.4％胰酶消化離心，用20-30mmol/L的氯化鈣溶液重懸混勻成單細胞懸液；將凝血酶溶于上述含軟骨細胞的氯化鈣溶液中，使氯化鈣溶液中含凝血酶的濃度為60-120U/ml，得溶液A；將纖維蛋白原粉末溶解于PBS溶液中，使PBS溶液中含纖維蛋白的濃度為50-100mg/ml，得溶液B；使用一次性醫(yī)用雙聯(lián)注射器分別吸取等量的溶液A和B，緩慢同時輕推兩側(cè)，將混合后的纖維蛋白膠均勻的涂抹在支架上，形成組織工程化軟骨移植物，將上述組織工程化軟骨移植物置于培養(yǎng)皿中于37℃、5％二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)50-90h，進行雙層無菌包裝，儲存于1-8℃專業(yè)醫(yī)用冷鏈內(nèi)，即得。