[發(fā)明專利]有機-無機雜化蛋白質(zhì)分子印跡毛細管整體柱

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210110319.0
• 申請日: 2012-04-16
• 公開（公告）號: CN102626609A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林子俺;林瑤;楊黃浩;張?zhí)m;陳國南
• 申請（專利權(quán)）人: 福州大學(xué)
• 主分類號: B01J20/26
• 分類號: B01J20/26;B01J20/281;B01J20/30;C07K1/14
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域，涉及一種分子印跡毛細管整體柱的制備方法，更具體地涉及一種有機-無機雜化蛋白質(zhì)分子印跡毛細管整體柱及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

分子印跡技術(shù)是指制備具有特異性識別作用的客體目標(biāo)分子的技術(shù)，是一種高選擇性的仿生識別方法。模板與客體的作用如同“鎖與鑰匙”之間的作用。分子印跡技術(shù)具有三大顯著特點：構(gòu)效預(yù)定性（predetermination）、特異識別性（specific?recognition）和廣泛實用性（practicability），因而發(fā)展迅速，在許多領(lǐng)域如：色譜分離、固相萃取、仿生傳感、模擬酶催化、臨床藥物分析研究等得到日益廣泛的研究。近年來，分子印跡技術(shù)逐步拓展到蛋白質(zhì)的分離、富集、純化、鑒定等與蛋白質(zhì)組學(xué)相關(guān)的生命科學(xué)領(lǐng)域。蛋白質(zhì)印跡聚合物的制備方法主要有包埋法，表面印跡法，和抗原決定基法。目前報導(dǎo)的蛋白質(zhì)分子印跡技術(shù)多為合成聚合物顆粒，其模板分子包埋嚴重，選擇性低，蛋白質(zhì)固有的特性如：體積龐大、構(gòu)象靈活、結(jié)構(gòu)復(fù)雜以及水溶性使得小分子的分子印跡技術(shù)不適用于制備蛋白質(zhì)分子印跡整體柱，因而有關(guān)于蛋白質(zhì)分子印跡整體柱的方法研究鮮有報道。蛋白質(zhì)印跡的困難集中在如何保持印跡蛋白質(zhì)構(gòu)象的的完整性，提高蛋白質(zhì)印跡聚合物的選擇性。

整體柱又稱連續(xù)床、棒狀柱或無柱塞柱，是具有無孔填料和膜的快速分離能力，又有高效液相色譜（HPLC）多孔填料的高容量，卻不增加柱背壓的一種新型高效色譜填料，已被廣泛用于高效液相色譜、毛細管電色譜及毛細管液相色譜中。目前制備整體柱的方法多采用自由基原位聚合的方法，與傳統(tǒng)的填充柱相比，此方法具有制備簡單、易于改性、高容量、傳質(zhì)快、柱效高以及試劑耗量少等優(yōu)點，特別適合于來源寶貴的微量生物樣品，是當(dāng)前微分離分析領(lǐng)域的研究熱點（Sykora.?D,?Svec.?F,?Frechet.?J.M,?J.?Chromatogr.?A,?1999,?852:?297）。按其基質(zhì)不同，整體柱可分為有機聚合物整體柱和無機硅膠整體柱。有機聚合物整體柱是由單體、引發(fā)劑、致孔劑等混合物通過原位聚合制備而成的棒狀整體，它具有制備簡單、結(jié)構(gòu)均勻、重現(xiàn)性較好、柱效較高及可進行快速分離等優(yōu)點，但有機聚合物整體柱存在著固有的缺點如：機械強度相對較差，特別是在有機溶劑的作用下，柱體會發(fā)生收縮或溶脹現(xiàn)象，致使柱性能發(fā)生變化，導(dǎo)致柱壽命縮短，微孔結(jié)構(gòu)不適宜小分子物質(zhì)的分離和分析，柱容量低。無機硅膠整體柱則不存在上述缺點，硅膠整體柱的特殊結(jié)構(gòu)使其具有極好的通透性，柱容量和柱效高，機械穩(wěn)定性好，但也存在一定的缺陷如：制備繁瑣、需高溫老化、抗溶劑性能差，另外，該柱有一定的pH使用范圍的限制。近年來發(fā)展的有機-無機雜化整體柱結(jié)合了有機聚合整體柱和無機硅膠整體柱的優(yōu)點，具有寬的pH適用范圍及良好的機械穩(wěn)定性。然而，“一步”或“二步”催化法可供選擇的有機硅烷種類較少，成本昂貴，反應(yīng)時間過長，操作繁瑣，嚴重制約著該方法的推廣。最新發(fā)展的將“一鍋法”應(yīng)用于有機-無機整體柱的制備（Wu?M.H,?Wu?R.A,?Wang?F.J,?Ren?L.B,?Dong?J,?Liu?Z,?Zou?H.F.?Anal.?Chem.,?2009,?81:?3529）則有效地解決“一步”或“二步”催化法存在的問題。“一鍋法”反應(yīng)中的多步反應(yīng)可以從相對簡單的原料出發(fā)，不經(jīng)中間體的分離，直接獲得結(jié)構(gòu)復(fù)雜的分子。具有取材廣泛、反應(yīng)條件溫和、反應(yīng)成本低廉以及環(huán)境友好等優(yōu)點。

有機-無機雜化蛋白質(zhì)分子印跡毛細管整體柱兼具有機-無機雜化整體柱和分子印跡的優(yōu)點，操作簡單，選擇性高，生物兼容性好，為蛋白質(zhì)的選擇性分離提供新的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種有機-無機雜化蛋白質(zhì)分子印跡毛細管整體柱及其制備方法和應(yīng)用，該方法制備過程簡單，合成成本低，制備的整體柱具有高選擇性及高物兼容性。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種有機-無機雜化蛋白質(zhì)分子印跡毛細管整體柱的制備方法包括如下步驟：

1）將硅烷前驅(qū)體、分散劑以及催化劑混合，于冰水浴下劇烈攪拌至透明粘稠狀；

2）將有機功能單體、交聯(lián)劑、致孔劑、引發(fā)劑和模板蛋白混合，于0～4℃下超聲至完全溶解后加入步驟1）的透明粘稠液，于0～4℃下超聲至混合均勻，將混合液注入經(jīng)乙烯基改性的石英毛細管內(nèi)，密封后置于水浴鍋內(nèi)，于35～45℃和50～60℃下分別加熱8～24小時完成聚合反應(yīng)，再用十二烷基磺酸鈉和乙酸的混合溶液沖洗制得所述的有機-無機雜化蛋白質(zhì)分子印跡毛細管整體柱。