[發明專利]微生物發酵生產低溫果膠酶的方法無效
| 申請號： | 201210109573.9 | 申請日： | 2012-04-13 |
| 公開（公告）號： | CN102653744A | 公開（公告）日： | 2012-09-05 |
| 發明（設計）人： | 遲乃玉;張慶芳;王曉輝;竇少華;于爽;王春雨 | 申請（專利權）人： | 大連大學 |
| 主分類號： | C12N9/26 | 分類號： | C12N9/26 |
| 代理公司： | 大連智慧專利事務所 21215 | 代理人： | 劉琦 |
| 地址： | 116622 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 微生物 發酵 生產 低溫 果膠酶 方法 | ||
1.一種微生物發酵生產低溫果膠酶的方法，其包括以下步驟：
(1)將產生果膠酶的微生物逐級低溫馴化，馴化溫度由高到低，25℃→22℃→20℃→18℃→16℃→14℃→12℃→10℃，使其在低溫環境中生長良好；
(2)按常規方法將低溫馴化后的果膠酶產生菌在10～16℃逐級擴大培養，制備成液體一級種子和二級種子；
(3)將液體一級種子或二級種子，按發酵液體積的3～9％接種量接入液體發酵培養基中，在10～16℃培養72～144h時，即微生物發酵生產低溫果膠酶結束；
(4)將(3)的發酵液在4,000～8,000rpm離心收集液體，收集到的液體即為粗酶液；
(5)根據不同需要和使用對象不同，將(4)得到的粗酶液進一步濃縮、分離純化，制備成不同活性、純度和劑型的酶制劑。
2.根據權利要求1所述的方法，在步驟(5)之后進一步包括：將步驟(5)得到的粗酶液進一步濃縮、分離純化，制備成不同活性、純度和劑型的酶制劑。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其中菌種低溫馴化培養基、液體種子培養基、發酵產酶培養基分別為：
(1)菌種低溫馴化培養基：蛋白胨8.0～12.0g，牛肉膏3.0～7.0g，果膠2.0～6.0g，NaCl?5.0～15.0g，瓊脂20g，蒸餾水1.0L，pH值自然，121℃高壓蒸汽滅菌30min。
(2)液體種子培養基：牛肉膏2.0～5.0g，蛋白胨7.0～12.0g，NaCl?3.0～6.0g，自來水1.0L，pH值自然，121℃高壓蒸汽滅菌30min。
(3)發酵產酶培養基：蛋白胨6.0～9.0g，酵母膏2.0～4.0g，果膠2.0～8.0g，NaCl?2.0～10.0g，MgSO4·7H2O?1.6～2.2g，自來水1.0L，pH值自然，121℃高壓蒸汽滅菌20min。
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