[發明專利]一種快速檢測馬鹿源性鹿產品的PCR試劑盒

無效

• 申請號: 201210108560.X
• 申請日: 2012-04-15
• 公開（公告）號: CN102605097A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 邢秀梅;楊福合;査代明;榮敏;蘇偉林;吳瓊
• 申請（專利權）人: 邢秀梅
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

1.一種快速檢測馬鹿源性鹿產品的PCR試劑盒，其特征在于包括以下引物：

上游引物：5’-?CATGTATAACAGTACATGAGTTAGCG?-3’

下游引物：5’-?CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’。

2.?權利要求1所述的快速檢測馬鹿源性鹿產品的PCR試劑盒，其特征在于包括DNA提取液、PCR反應液和陰性標準品；

所述的DNA提取液：

（1）低鹽緩沖液（pH?7.6-7.8）：12-13份Tris堿（三羥甲基氨基甲烷），32-35份?Na₂EDTA（乙二胺四乙酸二鈉），7-8份MgCl₂，4-5份NaCl,余份為水；

（2）細胞裂解液：4-6份?SDS十二烷基硫酸鈉，4-6份Triton?X-100(聚乙二醇對異辛基苯基醚)，1000份低鹽緩沖液；

所述的PCR反應液：

ddH₂O?、10?×?PCR?Buffer?、dNTPs?、上游引物、下游引物、Taq酶；

具體引物序列為：

上游引物：5’-?CATGTATAACAGTACATGAGTTAGCG?-3’

下游引物：5’-?CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’

陰性標準品：為無菌雙蒸水。

3.權利要求2所述的快速檢測馬鹿源性鹿產品的PCR試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

1）DNA提取液

（1）低鹽緩沖液（pH?7.6-7.8）：12-13份Tris堿（三羥甲基氨基甲烷），32-35份?Na₂EDTA（乙二胺四乙酸二鈉），7-8份MgCl₂，4-5份NaCl,余份為水；

（2）細胞裂解液：4-6份?SDS十二烷基硫酸鈉，4-6份Triton?X-100(聚乙二醇對異辛基苯基醚)，1000份低鹽緩沖液；

2)PCR反應液；

（1）引物設計：在馬鹿的線粒體DNA?D-loop區域，設計一對特異性引物，包括一個上游引物和一個下游引物；

序列如下：

上游引物：5’-?CATGTATAACAGTACATGAGTTAGCG?-3’

下游引物：5’-?CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’

PCR反應液：

ddH₂O??9.3ul，10?×?PCR?Buffer??1.5ul，dNTPs(100?uM)??2.0ul，上游引物(20?uM)??0.5ul，下游引物?(20?uM)???0.5ul，Taq酶(5U/ul)???0.2ul；

（3）陰性標準品：為無菌雙蒸水。