[發明專利]一種快速檢測馬鹿源性鹿產品的PCR試劑盒

無效

• 申請號: 201210108560.X
• 申請日: 2012-04-15
• 公開（公告）號: CN102605097A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 邢秀梅;楊福合;査代明;榮敏;蘇偉林;吳瓊
• 申請（專利權）人: 邢秀梅
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 陳宏偉

技術領域：

本發明公開一種快速檢測馬鹿源性鹿產品的PCR試劑盒，特別涉及檢測鹿產品中是否含有馬鹿產品的成分。用于快速準確識別鹿產品，屬于生物檢測試劑盒技術領域。

背景技術：

鹿產品是鹿的一些組織或者器官，主要包括有：鹿茸，鹿心，鹿腎，鹿胎，鹿筋，鹿鞭，鹿尾，鹿肉和鹿血等。由于鹿產品大多為名貴中藥材，價格昂貴，所以市場上屢見用偽劣產品來冒充名貴的鹿產品。

目前，鹿產品的鑒定大多采用傳統方法，主要包括性狀鑒定、顯微鑒定和理化鑒定。雖然傳統鑒定方法簡單、快捷、成本低，但影響傳統鑒定方法的因素很多（如人為因素、環境因素、營養因素），因而不能準確地判斷鹿產品的偽劣情況。比如在鹿產品的加工過程中，其性狀、顯微結構、理化性質等常常發生改變，利用傳統鑒定方法來鑒定鹿產品可能會出現誤判。然而，分子鑒定方法（基于DNA的方法）不受這些因素的影響，且具有準確性大、靈敏度高、穩定性好、通用性強等特點。

發明內容：

本發明提供一種快速檢測馬鹿源性鹿產品的PCR試劑盒，解決了鹿產品中是否含有馬鹿成分的問題。

本發明還提供了上述快速檢測鹿產品的PCR試劑盒的制備方法，通過一個PCR方法反應體系采用一步反應來鑒別鹿產品中的馬鹿源性成分。

本發明提供的快速檢測馬鹿源性鹿產品的PCR試劑盒，其特征在于：

包括DNA提取液、PCR反應液和陰性標準品：

所述的DNA提取液：

（1）低鹽緩沖液（pH?7.6-7.8）：12-13份Tris堿（三羥甲基氨基甲烷），32-35份?Na₂EDTA（乙二胺四乙酸二鈉），7-8份MgCl₂，4-5份NaCl,余份為水；

（2）細胞裂解液：4-6份?SDS十二烷基硫酸鈉，4-6份Triton?X-100(聚乙二醇對異辛基苯基醚)，1000份低鹽緩沖液；

所述的PCR反應液：

ddH₂O?、10?×?PCR?Buffer?、dNTPs?、上游引物、下游引物、Taq酶；

具體引物序列為：

上游引物：5’-?CATGTATAACAGTACATGAGTTAGCG?-3’

下游引物：5’-?CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’

陰性標準品：為無菌雙蒸水。

本發明所述快速檢測馬鹿源性鹿產品的PCR試劑盒的制備方法，包括以下步驟：

1）DNA提取液

（1）低鹽緩沖液（pH?7.6-7.8）：12-13份Tris堿（三羥甲基氨基甲烷），32-35份?Na₂EDTA（乙二胺四乙酸二鈉），7-8份MgCl₂，4-5份NaCl,余份為水；

（2）細胞裂解液：4-6份?SDS十二烷基硫酸鈉，4-6份Triton?X-100(聚乙二醇對異辛基苯基醚)，1000份低鹽緩沖液；

2）PCR反應液。

（1）引物設計：在馬鹿的線粒體DNA?D-loop區域，設計一對特異性引物，包括一個上游引物和一個下游引物。序列如下：

上游引物：5’-?CATGTATAACAGTACATGAGTTAGCG?-3’

下游引物：5’-?CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’

（2）PCR反應液：

ddH₂O??9.3ul，10?×?PCR?Buffer??1.5ul，dNTPs(100?uM)??2.0ul，上游引物(20?uM)??0.5ul，下游引物?(20?uM)???0.5ul，Taq酶(5U/ul)???0.2ul。

（3）陰性標準品：為無菌雙蒸水。

本發明的馬鹿源性鹿產品PCR檢測的使用方法：

（1）從待檢樣品中提取基因組DNA；

（2）制備PCR反應體系：

取步驟(1)中的DNA?1ul和陰性對照加入到PCR反應液中，用PCR儀進行擴增；

（3）設定反應程序進行PCR擴增，反應程序均如下：

94℃??5min；94℃??30s，62℃??30s，72℃??30s，?72℃??5min，擴增30個循環。

（4）反應結束后取5?μl?PCR產物在1%瓊脂糖凝膠電泳進行分析，紫外燈下觀察結果。