[發明專利]一種快速檢測水鹿源性鹿產品的PCR試劑盒及制備方法無效
| 申請號： | 201210108559.7 | 申請日： | 2012-04-15 |
| 公開（公告）號： | CN102605096A | 公開（公告）日： | 2012-07-25 |
| 發明（設計）人： | 邢秀梅;楊福合;査代明;榮敏;蘇偉林;吳瓊 | 申請（專利權）人： | 邢秀梅 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100 | 代理人： | 陳宏偉 |
| 地址： | 130000 吉*** | 國省代碼： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 快速 檢測 水鹿 源性鹿 產品 pcr 試劑盒 制備 方法 | ||
1.?一種快速檢測水鹿源性鹿產品的PCR試劑盒，其特征在于包括以下引物：
上游引物：5’-ATAACCTTGCATACTCGCGGTGC-3’
下游引物：5’-CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’。
2.?權利要求1所述的快速檢測水鹿源性鹿產品的PCR試劑盒，其特征在于包括DNA提取液、PCR反應液和陰性標準品；
所述的DNA提取液：
（1）低鹽緩沖液（pH?7.6-7.8）：12-13份Tris堿（三羥甲基氨基甲烷），32-35份?Na2EDTA（乙二胺四乙酸二鈉），7-8份MgCl2，4-5份NaCl,余份為水；
（2）細胞裂解液：4-6份?SDS十二烷基硫酸鈉，4-6份Triton?X-100(聚乙二醇對異辛基苯基醚)，1000份低鹽緩沖液；
所述的PCR反應液：
ddH2O?、10?×?PCR?Buffer?、dNTPs?、上游引物、下游引物、Taq酶；
具體引物序列為：
上游引物：5’-ATAACCTTGCATACTCGCGGTGC-3’
下游引物：5’-CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’
陰性標準品：為無菌雙蒸水。
3.權利要求2所述的快速檢測水鹿源性鹿產品的PCR試劑盒的制備方法，包括以下步驟：
1）DNA提取液
（1）低鹽緩沖液（pH?7.6-7.8）：12-13份Tris堿（三羥甲基氨基甲烷），32-35份?Na2EDTA（乙二胺四乙酸二鈉），7-8份MgCl2，4-5份NaCl,余份為水；
（2）細胞裂解液：4-6份?SDS十二烷基硫酸鈉，4-6份Triton?X-100(聚乙二醇對異辛基苯基醚)，1000份低鹽緩沖液；
2)PCR反應液；
（1）引物設計：在水鹿的線粒體DNA?D-loop區域，設計一對特異性引物，包括一個上游引物和一個下游引物；序列如下：
上游引物：5’-ATAACCTTGCATACTCGCGGTGC-3’
下游引物：5’-CATGGTAATTAAGCTCGTGATCTA-3’
PCR反應液：
ddH2O??9.3ul，10?×?PCR?Buffer??1.5ul，dNTPs(100?uM)??2.0ul，上游引物(20?uM)??0.5ul，下游引物?(20?uM)???0.5ul，Taq酶(5U/ul)???0.2ul；
（3）陰性標準品：為無菌雙蒸水。
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