[發明專利]微生物發酵生產谷氨酸脫氫酶的方法無效
| 申請號： | 201210106727.9 | 申請日： | 2012-04-12 |
| 公開（公告）號： | CN102653736A | 公開（公告）日： | 2012-09-05 |
| 發明（設計）人： | 張慶芳;遲乃玉;竇少華;王曉輝;于爽;石淑鈺 | 申請（專利權）人： | 大連大學 |
| 主分類號： | C12N9/06 | 分類號： | C12N9/06 |
| 代理公司： | 大連智慧專利事務所 21215 | 代理人： | 劉琦 |
| 地址： | 116622 遼*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 微生物 發酵 生產 谷氨酸 脫氫酶 方法 | ||
1.一種微生物發酵生產谷氨酸脫氫酶(簡寫為GDH)的方法，其包括以下步驟：
(1)將產生GDH的微生物進行6～10次活化，再經過產物定向馴化4～6次，使其在24～30℃環境條件下生長良好；
(2)按常規方法將產物定向馴化后的GDH產生菌在24～30℃逐級擴大培養，制備成液體一級種子和二級種子；
(3)將液體一級種子或二級種子，按發酵液體積的3～9％接種量接入液體發酵培養基中，在24～30℃培養60～114h時，即微生物發酵生產GHD結束；
(4)將(3)的發酵液在6,000～8,000rpm離心收集液體，用蒸餾水洗滌數次之后離心收集沉淀；
(5)將沉淀懸浮于緩沖液中，加石英砂研磨破碎，10,000～14,000rpm離心，收集到的上清為DGH粗酶液；
(6)根據不同需要和使用對象不同，將(5)得到的粗酶液進一步濃縮、分離純化，制備成不同活性、純度和劑型的酶制劑。
2.根據權利要求1所述的方法，在步驟(6)之后進一步包括：將步驟(6)得到的粗酶液進一步濃縮、分離純化，制備成不同活性、純度和劑型的酶制劑。
3.根據權利要求1或2所述的方法，其中菌種定向馴化培養基、液體種子培養基、發酵產酶培養基分別為：
(1)菌種定向馴化培養基：葡萄糖8.0～12.0g，蛋白胨18.0～22.0g，牛肉膏16.0～24.0g，NaCl?4.0～6.0g，pH值自然，121℃高壓蒸汽滅菌30min。
(2)液體種子培養基：葡萄糖22.0～26.0g，玉米漿24.0～28.0g，尿素1.5～3.5g，K2HPO4?1.0～2.5g，MgSO4?0.4～0.8g，FeSO4?0.002～0.006g，MnSO4?0.004～0.008g，自來水1.0L，pH值自然，121℃高壓蒸汽滅菌30min。
(3)發酵產酶培養基：葡萄糖25.0～45.0g，玉米漿4.0～8.0g，尿素4.0～6.0g，K2HPO4?0.5～2.5g，FeSO4?0.001～0.004g，MgSO4?5.0～7.0g，MnSO4?0.002～0.005g，自來水1.0L，pH值自然，121℃高壓蒸汽滅菌30min。
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