[發(fā)明專利]發(fā)熱伴血小板減少綜合癥布尼亞病毒環(huán)SFTSV介導等溫擴增快速檢測試劑盒及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210106183.6
• 申請日: 2012-04-12
• 公開（公告）號: CN102618669A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發(fā)明（設計）人: 李兵;黃尉初;劉元東;車吉泊;靳曉紅
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍濟南軍區(qū)聯(lián)勤部疾病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 濟南圣達知識產(chǎn)權代理有限公司 37221
• 代理人: 楊琪

技術領域

本發(fā)明涉及一種發(fā)熱伴血小板減少綜合癥布尼亞病毒環(huán)SFTSV介導等溫擴增快速檢測試劑盒，及其使用方法，以及在檢測布尼亞病毒中的應用。?

背景技術

發(fā)熱伴血小板減少綜合癥布尼亞病毒(Severe?fever?with?thrombocytopenia?syndrome?bunyavirus，SFTSV)，目前已被確認為是2004年以來湖北、河南、江蘇、浙江等地區(qū)高度散發(fā)出現(xiàn)的發(fā)熱伴血小板減少綜合征的主要病原體。經(jīng)國家疾控中心相關研究，該病毒屬于布尼亞病毒科白蛉病毒屬的一種新病毒。?

與其他布尼亞病毒科白蛉病毒屬病毒相似，SFTSV的基因組由大(L)、中(M)、小(S)3個單股負鏈RNA片段組成。各片段末端互補。其中大(L)片段全長6368個核苷酸，編碼RNA依賴型RNA聚合酶(RNA?dependent?RNA?polymerase，RdRP)；中(M)片段全長3378個核苷酸，編碼一個具有1073個氨基酸的膜蛋白前體，該蛋白前體經(jīng)宿主細胞蛋白酶修飾，可進一步形成Gn膜蛋白和Gc膜蛋白；小(S)片段全長1744個核苷酸，具有雙向讀碼框，分別編碼核蛋白(Nucleocapsid?protein，N)和非結構蛋白NSs。目前白蛉屬病毒分兩個組，一組為人類致病病毒組，如立夫特谷熱病毒(Rift?Vally?Fever?Virus)等，另一組為對人類不致病的病毒組，如烏庫病毒(Uukuniemi?virus)。而SFTSV經(jīng)分析應屬新的第三組病毒。?

自2004年以來，我國多省份陸續(xù)發(fā)生了發(fā)熱伴出血，白細胞減少及血小板減少，多臟器受損的病例。病人多來自華中山區(qū)，農(nóng)業(yè)區(qū)，流行時間為每年4到8月份，與節(jié)肢動物活動繁殖期相吻合。病例都有明確的蜱蟲叮咬歷史，其發(fā)病死亡率達到12％-30％。在2009年，在河南一份發(fā)熱伴血小板減少綜合征病例標本中分離到一株新型布尼亞病毒。后又在2010年分離到20株同種病毒。經(jīng)相關基因組生物信息學分析和電子顯微鏡形態(tài)學研究，該新型病毒屬于布尼亞病毒科白蛉病毒屬的一種新病毒，命名為發(fā)熱伴血小板減少綜合癥布尼亞病毒，即SFTSV。?

此外，這類發(fā)熱伴血小板減少綜合癥還有另外一種主要病原體，即嗜吞噬細胞無形體(Anaplasma?phagocytophilum)。嗜吞噬細胞無形體感染產(chǎn)生的癥狀與SFTSV十分相似，沒有典型特征性癥狀和區(qū)別，該無形體感染的發(fā)病死亡率達到22％。?

目前，這類發(fā)熱伴出血，白細胞減少及血小板減少的病例，主要就是由嗜吞噬細胞無形體(Anaplasma?phagocytophilum)和新型布尼亞病毒SFTSV感染引起。雖然這兩種感染在癥?狀表現(xiàn)上沒有明顯區(qū)別，死亡率也都很高，但其對癥治療方法則差別很大。對于嗜吞噬細胞無形體感染，主要應用強力霉素和四環(huán)素。而對抗生素和抗病毒藥物不敏感。過多使用其他抗生素和抗病毒藥物還會造成器官負擔加重，臟器受損，病死率上升。對于新型布尼亞病毒SFTSV感染，則應盡早使用利巴韋林等抗病毒藥物及抑制后續(xù)細菌真菌感染的各類敏感型抗生素配合治療。?

由此可見，對于因這兩類病原體感染引起的出血伴血小板減小綜合癥病例，必須盡可能的以最快速度獲得精確的定性診斷結果，這樣才能及時為患者制定正確的治療方案，否則，誤診，延誤，就會導致病情的延誤和錯誤的治療方案，甚至錯過治療時機，造成病人死亡。所以，目前急需能快速、精確的診斷這些主要病原體，尤其是對新型SFTSV病毒進行快速精確診斷的診斷方法，并且要求這種診斷方法操作簡便，成本低廉，適于農(nóng)村，山區(qū)等欠發(fā)達地區(qū)有限的醫(yī)療資源和人員、設備條件，還要具有良好的靈敏度和高度的特異性。?

根據(jù)衛(wèi)生部2010年發(fā)布的《發(fā)熱伴血小板減少綜合征診療方案》，我國檢測新型布尼亞病毒SFTSV的檢測方法主要有：(1)血清中特異性抗體的檢測；(2)病原體核酸的PCR檢測；(3)病毒分離培養(yǎng)等方法。傳統(tǒng)的血清學檢測方法和病毒分離培養(yǎng)法。這些檢測法本身大都需要數(shù)周時間才能獲得準確的結果，完全無法及時對發(fā)病病患做出及時的診斷，且大都要求據(jù)有相當水準的實驗技能和一些精密的診斷儀器。因此無法滿足在農(nóng)村，山區(qū)等條件艱苦地區(qū)開展。此外，由于患者血清中病毒血癥的發(fā)生要大大早于病毒的特異性抗體的出現(xiàn)，因此相比于傳統(tǒng)的血清學檢測方案，基于核酸檢測的PCR技術可以在更早的階段對病原體做出精確的診斷。但是，PCR檢測技術需要需要昂貴的設備和試劑，熒光定量PCR更是需要昂貴的探針和復雜的操作步驟，對人員的操作水平也有較高的要求，不適于在鄉(xiāng)村，山區(qū)，縣一級衛(wèi)生院等一線采用。?

發(fā)明內(nèi)容