[發明專利]一種苯環利定人工抗原的制備方法有效
| 申請號： | 201210104479.4 | 申請日： | 2012-04-11 |
| 公開（公告）號： | CN102627696A | 公開（公告）日： | 2012-08-08 |
| 發明（設計）人： | 邵越水;林燕芳 | 申請（專利權）人： | 杭州培樂生物技術有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/765 | 分類號： | C07K14/765;C07K1/113 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100 | 代理人： | 黎雙華;徐關壽 |
| 地址： | 310018 浙江省杭州市杭州*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 苯環 人工 抗原 制備 方法 | ||
1.一種苯環利定人工抗原的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)?制備人工半抗原：
(a)?將1-苯基環己醇與疊氮鈉、三氟乙酸以摩爾比為1：2：5.7溶于氯仿中，室溫攪拌反應5小時；反應結束后用濃氨水調至堿性，有機相經雙蒸水和飽和食鹽水溶液洗滌后，減壓蒸餾得到含疊氮基化合物????????????????????????????????????????????????；TLC：層析液為正己烷：乙酸乙酯=4:1，產物Rf?=0.7~0.8；
(b)?將含疊氮基化合物與氫化鋁鋰以摩爾比為1：1.5溶于無水乙醚中,?冰浴反應1小時后，再室溫攪拌反應5小時；反應結束后加入雙蒸水和氫氧化鈉水溶液，氯仿萃取，有機相減壓蒸餾后經薄層層析法純化得到產物1-苯基環己胺；TLC：層析液為石油醚：乙酸乙酯=2:1，產物Rf?=0.2~0.3；
????(c)?將產物1-苯基環己胺與戊二酸酐以摩爾比為1：1.2溶于無水吡啶中，100℃反應5小時；反應結束后進行減壓蒸餾,?得到的粗產物經薄層層析法純化得到苯環利定半抗原；TLC：層析液為為95%乙醇，產物Rf?=0.5~0.6；
????(2)?制備苯環利定人工抗原：
(d)?將半抗原與N-羥基琥珀酰亞胺、環己基碳酰二亞胺以摩爾比為1:1.5:1.5溶于N,N-二甲基甲酰胺中，室溫攪拌反應18小時，反應結束后離心取上清液記為A液；
(e)?將氯化鈉與十二水磷酸氫二鈉、二水磷酸二氫鈉以摩爾比為78.3:4.2:1溶于雙蒸水中，制備鈉離子濃度為0.1mol/L的PBS緩沖液，pH為7.2~7.4；
(f)?將牛血清蛋白溶于PBS緩沖液中，得到濃度為20mg/ml的B液；
(g)?將A液緩慢滴加到B液，A液與B液的體積比為1:5，得到的混合液在4℃條件下靜置保存過夜，得到人工抗原混合液；
(h)?將人工抗原混合液于PBS緩沖液中透析，透析結束后離心取上清液即得到人工抗原：苯環利定-牛血清蛋白。
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