[發明專利]一種細胞水平篩選金屬基質蛋白酶抑制劑的方法有效
| 申請號： | 201210103880.6 | 申請日： | 2012-04-11 |
| 公開（公告）號： | CN102618620A | 公開（公告）日： | 2012-08-01 |
| 發明（設計）人： | 魯曉鋒;史小娟 | 申請（專利權）人： | 上海健耕醫藥科技有限公司;上海云澤生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/02 | 分類號： | C12Q1/02;G01N21/64 |
| 代理公司： | 上海泰能知識產權代理事務所 31233 | 代理人： | 黃志達;謝文凱 |
| 地址： | 201112 上海市閔行區*** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 細胞 水平 篩選 金屬 基質 蛋白酶 抑制劑 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種細胞水平篩選金屬基質蛋白酶抑制劑的方法，包括：
(1)設計引物，PCR完成擴增金屬基質蛋白酶的全長cDNA；
(2)將上述擴增的cDNA插入pRetroX-Tight-Pur的多克隆位點，構建以Retro-X?Tet-Off為載體的表達體系；
(3)將上述構建完成的載體對細胞系進行轉染，并篩選陽性克隆，當細胞鋪滿皿底后，將培養基換成不含DOX的培養基，誘導MMP的表達；
(4)設空白對照組、陽性對照組、陰性對照組和不同藥物濃度處理組，用細胞膜探針對細胞膜進行染色觀察，利用對細胞形態學的分析評估候選待評價藥物對MMP的作用。
2.根據權利要求1所述的一種細胞水平篩選金屬基質蛋白酶抑制劑的方法，其特征在于：所述步驟(1)中的引物為上游引物：TGAGGATCCATGCATCCAGGGTCCTGGC；下游引物：AGCTCGCGACTTAACACCACAAAATGG。
3.根據權利要求1所述的一種細胞水平篩選金屬基質蛋白酶抑制劑的方法，其特征在于：所述步驟(3)中的細胞系為PCS-100-011細胞系。
4.根據權利要求1所述的一種細胞水平篩選金屬基質蛋白酶抑制劑的方法，其特征在于：所述步驟(4)中的細胞膜探針為DiI細胞膜探針。
下載完整專利技術內容需要扣除積分，VIP會員可以免費下載。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于上海健耕醫藥科技有限公司;上海云澤生物科技有限公司，未經上海健耕醫藥科技有限公司;上海云澤生物科技有限公司許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201210103880.6/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
