[發明專利]截短的細粒棘球蚴EG95蛋白重組畢赤酵母高密度發酵工藝

無效

• 申請號: 201210103719.9
• 申請日: 2012-04-10
• 公開（公告）號: CN102732436A
• 公開（公告）日: 2012-10-17
• 發明（設計）人: 賈萬忠;婁忠子;閆鴻斌;李宏民;倪興維
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12N1/16
• 分類號: C12N1/16;C12P21/02;C12R1/84
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責任公司 62102
• 代理人: 張晉

1.截短的細粒棘球蚴EG95蛋白的tEG95重組畢赤酵母高密度發酵方法中發酵前的工作種子培養方法，其特征在于：挑取1個重組酵母工程菌EG95-1的單克隆于YPD液體培養基中，培養至菌液OD₆₀₀為5.0左右，得到一級種子培養液；再將上述培養液轉接BMGY培養基，培養至菌液濃度OD₆₀₀達到40.0左右，得到發酵工作種子液，上述培養過程均在28℃下進行，其中的重組酵母工程菌EG95-1單克隆菌株于2012年02月16日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC?No5764。

2.截短的細粒棘球蚴EG95蛋白tEG95重組畢赤酵母高密度發酵方法，其特征在于將由權利要求1所述的將發酵工作種子液按1∶10的體積比轉接于2000mL?BSM液體培養基，調整培養基pH到5.5開始增菌，增菌過程補加含重量體積比為50％甘油和體積比為1.2％PTM1的水溶液的補料1溶液，待菌液OD₆₀₀達到90.0左右，即重組酵母菌濕重達到140mg/mL左右，停加補料1溶液并繼續培養至耗盡甘油，再在培養體系中分階段加入含體積比為1.2％PTM1的甲醇溶液的補料2溶液進行蛋白誘導表達，第一階段的補料2的補加流速為10mL/h，補加3h，停加補料2約1h，至誘導后4h；第二階段的補料2的補加流速為15mL/h，補加5h，停加2h，至誘導后11h；第三階段的補料2的補加流速為20mL/h，補加10h，停加3h，至誘導后24h；第四階段的補加流速為25mL/h，補加72h，至誘導后96h，整個發酵過程的溫度均為28℃。