[發明專利]一種檢測纖維二糖脫氫酶活性的方法

有效

• 申請號: 201210102860.7
• 申請日: 2012-04-10
• 公開（公告）號: CN102618622A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 賴萃;曾茁桐;曾光明;黃丹蓮;趙美花;危臻;黃超;李寧杰;許飄;張辰;李芳玲
• 申請（專利權）人: 湖南大學
• 主分類號: C12Q1/32
• 分類號: C12Q1/32;G01N21/55
• 代理公司: 湖南兆弘專利事務所 43008
• 代理人: 趙洪;楊斌

1.一種檢測纖維二糖脫氫酶活性的方法，包括以下步驟：

（1）納米金顆粒的制備：取HAuCl₄水溶液加熱攪拌至沸騰，然后邊攪拌邊加入檸檬酸鈉溶液，直至混合溶液顏色轉為清亮橘紅色后停止加熱，繼續攪拌，室溫冷卻，得含納米金顆粒的溶液；

（2）檢測體系的制備：將上述含納米金顆粒的溶液加入到緩沖溶液中，再加入纖維二糖溶液、氯金酸溶液和表面活性劑溶液，調節混合溶液中各組分的濃度，使所述納米金顆粒、纖維二糖在混合溶液中的濃度分別控制在0.3nM～0.4nM和0.4?mM～0.5mM，配得檢測體系；

（3）酶活測定：將待測溶液按照1∶（4.5～5.5）的體積比添加到所述的檢測體系中，混合均勻，待充分反應完全后，用紫外可見分光光度計對反應后的產物體系進行光譜掃描，測得產物體系中納米金顆粒的表面等離子體共振吸收峰強度，再根據測得的表面等離子體共振吸收峰強度數值和已經建立的線性回歸方程，得到待測溶液中纖維二糖脫氫酶的酶活。

2.根據權利要求1所述的檢測纖維二糖脫氫酶活性的方法，其特征在于：所述檢測體系中，所述纖維二糖、氯金酸和納米金的摩爾比為（2～2.5）∶1∶（1.5×10^-6～2×10^-6）。

3.根據權利要求1所述的檢測纖維二糖脫氫酶活性的方法，其特征在于，所述酶活測定步驟中，所述反應的測定條件為：反應溫度控制在30℃～37℃，反應pH值為4.5～5.0，反應時間為10min～15min。

4.根據權利要求1所述的檢測纖維二糖脫氫酶活性的方法，其特征在于，所述表面活性劑為十六烷基三甲基氯化銨。

5.根據權利要求1～4中任一項所述的檢測纖維二糖脫氫酶活性的方法，其特征在于，所述待測溶液為黃孢原毛平革菌培養后產出的粗酶液。

6.根據權利要求5所述的檢測纖維二糖脫氫酶活性的方法，其特征在于：所述線性回歸方程為A=0.0349x+0.5793，其中，A為測得的表面等離子體共振吸收峰強度數值，x為所述待測溶液中含有的纖維二糖脫氫酶的酶活，單位為U/L。

7.根據權利要求6所述的檢測纖維二糖脫氫酶活性的方法，其特征在于：所述待測溶液中纖維二糖脫氫酶酶活的檢測范圍為1.3?U/L～9.5U/L。

8.根據權利要求1～4中任一項所述的檢測纖維二糖脫氫酶活性的方法，其特征在于：所述待測溶液中纖維二糖脫氫酶酶活的檢測范圍為1.3?U/L～9.5U/L。