[發明專利]柑橘黃龍病的LAMP快速檢測方法

無效

• 申請號: 201210101160.6
• 申請日: 2012-04-09
• 公開（公告）號: CN102605092A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 黃麗;唐科志;周常勇;李中安;蘇華楠
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院柑桔研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 重慶市前沿專利事務所 50211
• 代理人: 郭云

1.一種柑橘黃龍病的LAMP快速檢測方法，其特征在于：包括用于檢測柑橘黃龍病的LAMP擴增特異性引物組，分別為：

omp-FIP

5′-GCCATGATACGACGCTTAGCA-TTGAGTGAGGGAGATCC?AAT-3′

omp-BIP

5′-CTGAAGTCAATATTTCGCAATTGCC-TTTACGCTCACCCTC?AGA-3′

omp-F3?5′-ATTCGGCGTGAACTTGAA-3′

omp-B3?5′-GCTATACCTACAGAACCAGC-3′。

2.根據權利要求1所述柑橘黃龍病的LAMP快速檢測方法，其特征在于：按照如下步驟完成：

(1)柑橘黃龍病病葉總DNA提取，采用CTAB法提取柑橘黃龍病DNA得到模板DNA溶液；

(2)柑橘黃龍病的LAMP擴增，配置反應體系為25μL，所述反應體系中各組分的含量為5×Reaction?Buffer、8mM?MgSO₄、1.2mMdNTPs、Bst?DNA聚合酶8U、1.6μM?omp-FIP、1.6μM?omp-BIP、0.2μM?omp-F3、0.2μM?omp-B3、模板DNA?1.0μL，加ddH₂O補足25μL，混勻，于63℃水浴鍋中反應70min，之后在80℃下滅活5min結束反應；所述5×Reaction?Buffer含100mM?Tris-HCl?pH?8.8、50mMKCl、50mM(NH₄)₂SO₄、0.5％Tween?20。

(3)反應結束后，觀察濁度，白色渾濁即為陽性，否則為陰性；或在反應液中加入SYBR?Green?I顯色液，出現綠色表明為陽性，橙色則表明為陰性；或用瓊脂糖凝膠電泳，獲取電泳圖譜，圖譜中出現特征性梯狀條帶為陽性，未出現特征性梯狀條帶為陰性。