[發(fā)明專利]一種大黃歐文氏菌及其在制備低乳糖牛奶中的應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210101015.8
• 申請日: 2012-04-09
• 公開（公告）號: CN102634468A
• 公開（公告）日: 2012-08-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 夏雨
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23C9/152;C12R1/18
• 代理公司: 北京君智知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 11305
• 代理人: 向華

【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明涉及一種大黃歐文氏菌(Erwinia?rhapontici)E602株，還涉及所述大黃歐文氏菌E602株的用途。?

【背景技術(shù)】

乳糖是一種二糖，由一分子葡萄糖和一分子半乳糖縮合而成。它在牛奶中的含量約為4.5-5.0％。牛奶中的乳糖會導(dǎo)致人體發(fā)生乳糖不耐癥。全球有約75％成年人有乳糖不耐癥，在亞洲約有60-90％患病率，非洲國家高達90-100％，在中國成年人中的發(fā)病率達90％。由于國內(nèi)這么多的人飲用牛乳會導(dǎo)致乳糖不耐癥，該病癥已妨礙了我國乳品工業(yè)的進一步發(fā)展。?

β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)又稱β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶(β-D-galactoside?galacto?hydrolase，EC?3.2.1.23)，商品名為乳糖酶(Lactase)，是一種重要的糖苷水解酶，它能將牛乳中的乳糖水解成半乳糖和葡萄糖，因此，利用這種酶可以有效地降低牛乳中的乳糖含量，從而解決牛乳飲用人群的乳糖不耐癥問題。?

β-半乳糖苷酶的來源較為廣泛，其中包括來源于大多數(shù)植物、動物和微生物等。在工業(yè)上，β-半乳糖苷酶往往來源于微生物。到目前為止，研究較多的產(chǎn)乳糖酶的微生物主要有大腸桿菌(Escherichia?coli)、乳鏈球菌(Streptococcus?lactis)、乳酸桿菌(Lactobacillus)、乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces?lactis)、米曲霉(Aspergillus?oryzae)和黑曲霉(Aspergillus?niger)等。而在工業(yè)中應(yīng)用較多的β-半乳糖苷酶主要來源于酵母和黑曲霉。近年來，隨著人們生活水平的提高，乳品工業(yè)對乳糖酶的需求越來越多，乳糖酶的研究開發(fā)相應(yīng)增加。?

目前，工業(yè)上使用的β-半乳糖苷酶主要是在中溫條件下具有較高活性的中溫酶，采用中溫β-半乳糖苷酶對牛乳中乳糖進行水解時，水解反應(yīng)的溫度是約37℃，因此，容易造成在牛乳水解過程中的微生物污染問題。?

近年來，乳糖酶的一個研究熱點是在較低溫度下具有較高活性的低溫乳糖酶(Cold-adaptive?β-Galactosidase)，這類酶適合于在較低溫度下(例如＜20℃)進行牛乳乳糖的水解，較低溫度能夠防止微生物污染，且低溫乳糖酶在牛乳巴氏殺菌溫度下能夠完全失活，因而可以保證牛乳中乳糖水解度基本一致。?

CN200710190755公開了一種大黃歐文氏菌（Erwinia?rhapontici）NX-5株，還涉及利用該大黃歐文氏菌NX-5株生產(chǎn)蔗糖異構(gòu)酶，再利用這種酶制備異麥芽酮糖。采用該菌株使蔗糖轉(zhuǎn)化率高達99.5%(W/W)，異麥芽酮糖轉(zhuǎn)化率達90%，轉(zhuǎn)化液中異麥芽酮糖濃度達500g/L，無水解副反應(yīng)，轉(zhuǎn)化液中幾乎不含葡萄糖和果糖，隨著反應(yīng)進行也不會使產(chǎn)物異麥芽酮糖轉(zhuǎn)化為其他成分，對工業(yè)化生產(chǎn)異麥芽酮糖十分有益。?

有關(guān)利用大黃歐文氏菌制備β-半乳糖苷酶及其應(yīng)用尚未見報道。因此，本發(fā)明人在總結(jié)現(xiàn)有技術(shù)的基礎(chǔ)上，通過大量實驗研究與分析，終于完成了本發(fā)明。?

【發(fā)明內(nèi)容】

[要解決的技術(shù)問題]?

本發(fā)明的目的是提供一種大黃歐文氏菌（Erwinia?rhapontici）E602株。?

本發(fā)明的另一個目的是提供所述大黃歐文氏菌（Erwinia?rhapontici）E602株的用途。?

[技術(shù)方案]?

本發(fā)明是通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)的。?

本發(fā)明涉及一種大黃歐文氏菌（Erwinia?rhapontici）E602株，該菌株已于2011年3月17日在北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，其保藏編號為CGMCC?No.4678。?

本發(fā)明還涉及所述的大黃歐文氏菌E602株在生產(chǎn)低乳糖牛奶中的用途。?

具體地，本發(fā)明涉及利用所述的大黃歐文氏菌E602株生產(chǎn)低乳糖牛奶的方法。?

該方法的步驟如下：?

A、制備一級種子?

將大黃歐文氏菌E602株甘油凍存管中菌液劃線至含IPTG和X-Gal的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，在培養(yǎng)箱中在溫度24-28℃下培養(yǎng)20-28h；從該營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基表面挑取藍色有金屬光澤的大黃歐文氏菌E602單菌落，轉(zhuǎn)移至4-6mL?LB液體培養(yǎng)基中，在溫度24-28℃與轉(zhuǎn)速180-220r/min的條件下培養(yǎng)10-14h，獲得一級種子；?

B、制備二級種子?