[發明專利]一種鴨疫里默氏桿菌－大腸桿菌穿梭表達載體及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201210100921.6
• 申請日: 2012-04-09
• 公開（公告）號: CN103361376A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發明（設計）人: 胡青海;于圣青;韓先干;丁鏟;仇旭升;宋翠萍;譚磊
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: C12N15/74
• 分類號: C12N15/74;C12N1/21;C12N15/64
• 代理公司: 上海百一領御專利代理事務所(普通合伙) 31243
• 代理人: 馬育麟

1.一種鴨疫里默氏桿菌－大腸桿菌穿梭表達載體，其特征在于，其核苷酸序列為：SEQ?ID?NO:1。

2.根據權利要求1所述的鴨疫里默氏桿菌－大腸桿菌穿梭表達載體，其特征在于，所述穿梭表達載體包括如下元件：鴨疫里默氏桿菌pRA0726質粒的復制起始蛋白編碼序列、鴨疫里默氏桿菌OmpA蛋白啟動子序列、大腸桿菌的復制起始序列、氨芐青霉素抗性基因、頭孢西丁抗性基因和多克隆位點。

3.根據權利要求1或2所述的鴨疫里默氏桿菌－大腸桿菌穿梭表達載體，其特征在于，其是以可在大腸桿菌工程菌中穩定存在和復制的質粒為骨架改造而來，所述質粒選自pCP29、pBR322、pUC19或pUC119。

4.根據權利要求1或2所述的鴨疫里默氏桿菌－大腸桿菌穿梭表達載體，其特征在于，所述的鴨疫里默氏桿菌－大腸桿菌穿梭載體攜帶OriT序列，以利于構建的穿梭表達載體通過接合轉導的方式導入鴨疫里默氏桿菌中。

5.根據權利要求1或2所述的鴨疫里默氏桿菌－大腸桿菌穿梭表達載體，其特征在于，其含有使所述表達質粒在鴨疫里默氏桿菌中穩定存在的鴨疫里默氏桿菌質粒的復制起始元件和使攜帶的外源質粒在鴨疫里默氏桿菌中表達的鴨疫里默氏桿菌基因的啟動子，以此使外源基因可在鴨疫里默氏桿菌中穩定表達。

6.根據權利要求2所述的鴨疫里默氏桿菌－大腸桿菌穿梭表達載體，其特征在于，所述鴨疫里默氏桿菌－大腸桿菌穿梭載體攜帶有抗性基因，以利于篩選重組質粒和攜帶質粒的重組細菌，所述穿梭表達載體中的頭孢西丁抗性基因可替換為紅霉素抗性基因或/和壯觀霉素抗性基因；氨芐青霉素抗性基因可替換為氯霉素或/和卡那霉素抗性基因。

7.根據權利要求2所述的鴨疫里默氏桿菌－大腸桿菌穿梭表達載體，其特征在于，所述穿梭表達載體中用于表達外源基因的鴨疫里默氏桿菌OmpA蛋白啟動子序列可替換為鴨疫里默氏桿菌其他基因的啟動子序列。

8.一種根據權利要求1-7任一所述的鴨疫里默氏桿菌－大腸桿菌穿梭表達載體在重組鴨疫里默氏桿菌中的應用，其用于抗多血清型的鴨疫里默氏桿菌病、抗鴨疫里默氏桿菌病和鴨病毒性肝炎以及鴨傳染病性疾病的聯合、多價重組疫苗，或者構建鴨疫里默氏桿菌突變株的互補菌株。