[發明專利]乳腺特異表達人殺菌通透性增強蛋白載體構建方法無效
| 申請號： | 201210100640.0 | 申請日： | 2012-04-07 |
| 公開（公告）號： | CN102676581A | 公開（公告）日： | 2012-09-19 |
| 發明（設計）人： | 張運海;章孝榮;桂濤;李運生;劉亞;陳建文;章美玲;張宇;劉星;方富貴;丁建平 | 申請（專利權）人： | 安徽農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 230036 *** | 國省代碼： | 安徽;34 |
| 權利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 乳腺 特異 表達 殺菌 通透 增強 蛋白 載體 構建 方法 | ||
1.乳腺特異表達人殺菌通透性增強蛋白載體構建方法，包括如下步驟：
(1)設計合成如下序列：XhoI酶切位點+Kozak序列+牛β-酪蛋白信號肽+人BPI的CDS序列+XhoI酶切位點，體外合成并克隆至pUC57載體的EcoRV酶切位點處，命名為pUC57-hBPI；
(2)使用限制性內切酶SalI分別酶切pUC57-hBPI、pBC1-loxp-neo-loxp-pBD；膠回收插入pUC57載體的體外合成的外源片段、pBC1-loxp-Neo-loxp片段；使用T4連接酶連接上述回收的片段；
(3)上述連接產物轉化至DH5α感受態細胞中，涂布至氨芐抗性平板，挑單菌落搖菌；設計引物hBPI1/hBPI2、hBPI3/hBPI4、hBPI5/hBPI6，使用菌液PCR法快速鑒定；
所述引物如下：
上游hBPI1：5’-ACCATGAAGGTCCTCATCCTT-3’，錨釘在插入序列的5’末端；
下游hBPI2：5’-ATAGACAACGTCTGCACCGAA-3’，錨釘在插入序列的3’末端；
上游hBPI3：5’-TCTTTGGTTCCTTTTAAAG-3’，錨釘在載體上XhoI插入位點上游骨架序列匹配；
下游hBPI4：5’-TCCATCACTGGTGGAGCAAA-3’，錨釘在插入序列的5’末端；
上游hBPI5：5’-CTTTGGTTCCTTTTAAAGGGAAG-3’，錨釘在載體上XhoI插入位點上游骨架序列匹配；
下游hBPI6：5’-TTTGTAGGGCTCTTAATTACTCA-3’，錨釘在載體上XhoI插入位點下游骨架序列匹配；
將上述引物使用菌液PCR鑒定后全為陽性的克隆進行測序，最終得到測序完全正確的陽性克隆pBC1-loxp-Neo-loxp-hBPI。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息，商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于安徽農業大學，未經安徽農業大學許可，擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作，請聯系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201210100640.0/1.html，轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
- 上一篇：一種雙光纖1×3 弧槽型耦合器
- 下一篇：一種治療口腔潰瘍的中藥制劑
