[發明專利]一種HBD3 乳腺特異性表達載體及構建的重組細胞

無效

• 申請號: 201210100590.6
• 申請日: 2012-04-09
• 公開（公告）號: CN102628061A
• 公開（公告）日: 2012-08-08
• 發明（設計）人: 余源;張涌;王勇勝;劉軍;權富生
• 申請（專利權）人: 西北農林科技大學;楊凌科元克隆股份有限公司
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N5/10;C12N15/873
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

技術領域

本發明屬于基因工程領域，涉及一種位點特異性整合的表達載體，特別涉及一種HBD3乳腺特異性表達載體及構建的重組細胞。?

背景技術

乳房炎是奶牛中很常見的疾病，這種炎癥是由多種病原微生物引起的，以大腸桿菌(E.coli)和葡萄球菌(S.aureus)為主(Bannerman?DD，Paape?MJ，Lee?JW，Zhao?X，Hope?JC，Rainard?P.Escherichia?coli?and?Staphylococcus?aureus?elicit?differential?innate?immune?responses?followingintramammary?infection.ClinDiagn?Lab?Immunol.2004May；11(3)：463-72.)。乳房炎對奶業造成了巨大的經濟損失，目前，治療乳房炎仍以抗生素的投放為主，但抗生素價格昂貴；而且長期使用抗生素會使細菌產生抗藥性，所以尋求一種新的治療乳房炎的方法迫在眉睫。?

自身能夠特異性的在乳房攜帶或者分泌乳房炎的因子，是解決奶牛乳房炎的理想方法，而這需要依賴于現代生物技術來構建轉基因奶牛來實現。而應用體細胞克隆技術生產轉基因動物已表現出強大的生命力(Jang?G，Bhuiyan?MM，Jeon?HY，Ko?KH，Park?HJ，Kim?MK，Kim?JJ，Kang?SK，Lee?BC，Hwang?WS.An?approach?for?producing?transgenic?cloned?cows?by?nuclear?transferof?cells?transfectedwithhumanalphal-antitrypsingene.Theriogenology.2006Jun；65(9)：1800-12.Epub?2005Nov?21.)，其突出的優點是將轉基因步驟提前到體細胞培養階段，直接利用已確定的整合有目的基因的體細胞作為和供體細胞進行體細胞核移植(SCNT)，這樣體細胞核移植前供體細胞的選擇不但可以提高轉基因動物的出生率還可以減低其生產成本(Wheeler?MB，Walters?EM.Transgenic?technology?and?applications?in?swine.Theriogenology.2001Nov1；56(8)：1345-69.)。?

人β-防御素3(HBD3)是人體產生的一種大小為4-5kD的抗菌肽，由45個氨基酸組成，它具有光譜、強效的抗多種微生物感染的作用，特別是對金黃色葡萄球菌等陽性菌有強烈殺傷作用(Chen?H，Xu?Z，Peng?L，Fang?X，Yin?X，Xu?N，Cen?P.Recent?advances?in?the?research?and?development?of?human?defensins.Peptides.2006Apr；27(4)：931-40.Epub?2005Oct?13.)。目前已有從人扁桃體組織、人新鮮包皮組織、新鮮的人肝癌組織等組織中克隆到了HBD3的cDNA，并構建了各種HBD3表達載體，在大腸桿菌、人的某些細胞中得到表達。?

然而，現有的轉基因動物生產技術仍然存在一定弊端：外源基因的隨機插入帶來的位置效應，即外源基因隨機插入到與細胞重要生命活動相關的基因內部引起其異常表達，或者外源基因插入異染色質區造成外源基因表達沉默；體細胞核移植技術作為轉基因動物生產的有效有段，其突出優點是將基因轉移提前到體細胞培養階段，可以有效的提高轉基因動物的出生率和控制生產成本[M.B.Wheeler?and?E.M.Walters.Transgenic?technology?and?applications?in?swine.Theriogenology2001，56(8)：1345-1369]，一般的，核供體細胞的準備需要經過藥物篩選獲得，而最終轉基因細胞中抗生素篩選標記的殘留，對轉基因動物安全及環境安全造成了潛在的威脅。?