[發(fā)明專利]堿性磷酸酶標(biāo)記抗體的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210099617.4
• 申請(qǐng)日: 2012-04-06
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102645531A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李子樵;王志文
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海藍(lán)怡科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/535
• 分類號(hào): G01N33/535
• 代理公司: 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 何新平

1.一種堿性磷酸酶標(biāo)記抗體的方法，采用如下步驟：

A)將5mg堿性磷酸酶溶解在含量為0.5ml濃度為0.05M，PH值為3.6-6.6的NaAc溶液中，使堿性磷酸酶的濃度為3-10mg/ml；

B)向步驟A中的酶溶液內(nèi)加入等體積的過(guò)碘酸鈉溶液，并在室溫為4攝氏度的條件下進(jìn)行氧化，氧化時(shí)間為20min；

C)向氧化后的酶溶液內(nèi)，加入與步驟A所得溶液等體積的乙二醇-NaCl溶液；

D)向步驟C中的溶液內(nèi)，加入含量為1.5ml的冰冷無(wú)水乙醇，混勻，并在室溫為-20℃的條件下靜置1小時(shí)，4000g離心10min，得到氧化好的酶；

E)用含量為0.5ml濃度為0.5M，pH值為8-10的碳酸鹽緩沖液溶解沉淀步驟D中得到的酶，并加戊二醛0.1ml，混勻；

F)按質(zhì)量比，酶∶抗體的比例范圍為1∶1至1∶4的比例，加入待標(biāo)記的抗體溶液進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)時(shí)間為1-3小時(shí)；

G)按質(zhì)量比，NaBH4∶酶的比例范圍為0.1∶1至0.2∶1的比例，加入NaBH4溶液，室溫放置1-3小時(shí)；

H)加入0.6ml的冰冷無(wú)水乙醇，并在-20℃的室溫下靜置1小時(shí)，4000g離心10分鐘；

I)按所需酶標(biāo)抗體濃度用PBS溶解或凍干保存。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性磷酸酶標(biāo)記抗體的方法，其特征在于：所述乙二醇-NaCl溶液的配方為NaCl，乙二醇和水。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的堿性磷酸酶標(biāo)記抗體的方法，其特征在于：所述的NaCl的含量為22g，乙二醇的含量為2.3ml，水的含量100ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的堿性磷酸酶標(biāo)記抗體的方法，其特征在于：所述待標(biāo)記的抗體溶液為HbcAb的PBS溶液。