[發明專利]他克莫司免疫原、抗他克莫司特異性抗體和他克莫司檢測試劑

有效

• 申請號: 201210098329.7
• 申請日: 2012-04-06
• 公開（公告）號: CN102617729A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 虞留明;田軍;袁紅霞;蔡江麗
• 申請（專利權）人: 蘇州博源醫療科技有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/795;C07K14/435;C07K16/44;G01N33/543;C07D498/18
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技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種他克莫司免疫原、抗他克莫司特異性抗體和他克莫司檢測試劑。

背景技術

他克莫司(Tacrolimus，FK506)，其結構式如式(II)所示。

式(II)

他克莫司是一種免疫抑制劑，是器官移植，特別是腎臟移植患者的常用藥物，移植后合理服用他克莫司可使器官免遭排斥。他克莫司劑量不足會導致機體對移植器官產生排斥反應；而劑量過高又會引起嚴重的副反應，包括腎臟毒性，肝臟毒性和其他一系列的并發癥。通過檢測病人全血中的他克莫司濃度，并結合其它臨床指征來合理用藥，是確保器官移植接受者獲得免疫抑制的最有效方法。

現有檢測他克莫司的方法主要是高效液相色譜法(High?performance?liquid?chromatography，HPLC)、液相色譜串聯質譜聯用法(Liquid?chromatography?tandem?mass?spectrometry，LC/MS/MS)、放免法和熒光偏振法。HPLC及LC/MS/MS方法前處理復雜，耗時，費用及對人員操作要求高；放免法對操作人員有放射性危害；而熒光偏振法的試劑主要依賴進口，費用極其昂貴。

發明內容

本發明就是為了彌補上述方法存在的缺陷，研制出了一種含有他克莫司特異性抗體的免疫檢驗試劑。該檢驗試劑靈敏度高、特異性強，可用于樣本中他克莫司含量的檢測，用于正確指導臨床給藥劑量。

本發明的一個目的在于提供一種他克莫司免疫原。

本發明的另一個目的在于提供利用本發明他克莫司免疫原制備得到的抗他克莫司特異性抗體。

本發明的再一個目的在于提供一種含有本發明抗他克莫司特異性抗體的檢測試劑。

本發明制備的他克莫司免疫原，免疫原性高，可以誘導得到高效價的抗他克莫司的特異性抗體。高效價的他克莫司特異性抗體研制的免疫試劑可以準確測定反應底物他克莫司。

為了達到上述目的，本發明所采取的技術方案如下：

他克莫司免疫原，其結構式如式(I)所示：

式(I)

式中，R為連接基團，載體具有免疫原性。

優選的，具有免疫原性的載體采用足夠大的具備免疫原性的物質即可，通常采用的免疫原性載體包括蛋白質和多肽。在本發明中載體優選為具有免疫原性的蛋白質，最常用的免疫原性載體包括血清蛋白，血藍蛋白(KLH)和甲狀腺球蛋白等。

在本發明的一種優選實施例中，上述他克莫司免疫原中R為N-(CH₂)_n-COO-或N-O-(CH₂)_n-COO-，n是1至20之間的整數。優選R為N-O-(CH₂)_n-COO-，n是1至10。更優選的R為N-O-(CH₂)₃-COO-。具有這種結構的他克莫司免疫原免疫原性高，可以誘導得到高效價的抗他克莫司特異性抗體。

本發明所提供的他克莫司免疫原可以采用多種常規方法制備而得，對于這些常規的制備方法本領域技術人員在本發明所提供的他克莫司免疫原的結構式的基礎上能夠經過合理分析進而制備獲得。

以下將給出一種他克莫司免疫原的制備方法，以供參考，具體制備方法如下：

(1)、制備具有式(III)中結構的他克莫司衍生物；

式(III)

(2)、將具有免疫原性的載體溶解形成具有免疫原性的載體溶液；

(3)、將具有式(III)中結構的他克莫司衍生物加入到上述具有免疫原性的載體溶液中，使具有式(III)中結構的他克莫司衍生物中連接基團所在部分和具有免疫原性的載體發生縮聚反應，形成的他克莫司免疫原。

當R為N-O-(CH₂)₃-COO時，上述他克莫司免疫原的合成途徑和方法如下：

(1)、具有式(III)中結構的他克莫司衍生物的合成

①、制備具有連接基團(N-O-(CH₂)₃-COO-基團)的鹽酸鹽：