[發明專利]他克莫司免疫原、抗他克莫司特異性抗體和他克莫司檢測試劑

有效

• 申請號: 201210098329.7
• 申請日: 2012-04-06
• 公開（公告）號: CN102617729A
• 公開（公告）日: 2012-08-01
• 發明（設計）人: 虞留明;田軍;袁紅霞;蔡江麗
• 申請（專利權）人: 蘇州博源醫療科技有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/795;C07K14/435;C07K16/44;G01N33/543;C07D498/18
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1.他克莫司免疫原，其結構式如式(I)所示：

式(I)

式中，R為連接基團，載體具有免疫原性。

2.根據權利要求1所述的他克莫司免疫原，其特征在于：載體為具有免疫原性的蛋白質。

3.根據權利要求1或2所述的他克莫司免疫原，其特征在于：R為N-(CH₂)_n-COO-，或者所述R為N-O-(CH₂)_n-COO-，n為1至20之間的整數；

優選地，R為N-O-(CH₂)_n-COO-，n為1至20之間的整數；更為優選地，所述R為N-O-(CH₂)₃-COO-。

4.一種抗他克莫司特異性抗體，由權利要求1-3中任意一項所述的他克莫司免疫原免疫動物后生產得到。

5.一種他克莫司檢測試劑，含有權利要求4所述的抗他克莫司特異性抗體和指示試劑。

6.根據權利要求5所述的他克莫司檢測試劑，其特征在于：所述指示試劑選自酶試劑、放射性同位素試劑、熒光試劑和化學發光試劑；優選地，所述指示試劑為酶試劑，由他克莫司酶標偶聯物和酶底物所組成；更為優選地，所述抗他克莫司特異性抗體結合在穩定的表面上。

7.一種權利要求1中所述的他克莫司免疫原的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)、制備具有式(III)中結構的他克莫司衍生物；

式(III)

(2)、將具有免疫原性的載體溶解形成具有免疫原性的載體溶液；

(3)、將具有式(III)中結構的他克莫司衍生物加入到上述具有免疫原性的載體溶液中，使具有式(III)中結構的他克莫司衍生物中連接基團所在部分和具有免疫原性的載體發生縮聚反應，形成的他克莫司免疫原。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于：當R為N-O-(CH₂)₃-COO時，所述步驟(1)包括：

用有機溶劑D溶解0.5-5.0g他克莫司和0.5-10g?4-胺氧基丁酸的鹽酸鹽，使兩者在第二催化劑的作用下發生反應，反應后經濃縮，加水用有機溶劑E萃取，經干燥、濃縮和純化得到具有式(III)中結構的他克莫司的衍生物；

優選地，所述有機溶劑D為乙酸乙酯，乙醚或氯仿；

優選地，所述有機溶劑E為乙酸乙酯或乙醚；

優選地，所述第二催化劑為醋酸鈉或對甲苯磺酸。

9.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于：當R為N-O-(CH₂)₃-COO時，所述步驟(1)中4-胺氧基丁酸的鹽酸鹽的制備方法如下：

用有機溶劑A溶解10-50g?N-羥基-鄰苯二甲酰亞胺和10-50g的5-溴戊酸乙酯，使其在第一催化劑的作用下進行加熱反應，生成物經有機溶劑B萃取，干燥得到4-鄰苯二甲酰亞胺氧基丁酸乙酯；

用無機酸C溶解4-鄰苯二甲酰亞胺氧基丁酸乙酯，經有所述機溶劑D萃取，萃取物經干燥得到所述4-(胺氧基)丁酸的鹽酸鹽；

優選地，所述有機溶劑A為二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、甲醇或乙醇；

優選地，所述有機溶劑B為乙酸乙酯，乙醚或氯仿；

優選地，所述有機溶劑C為鹽酸溶液或硫酸溶液；

優選地，所述第二催化劑為甲醇鈉，氧化鉀或氧化鈉。

10.根據權利要求8所述的制備方法，其特征在于：當R為N-O-(CH₂)₃-COO時，所述步驟(3)包括：

用所述有機溶劑A溶解上述具有式(III)中結構的他克莫司衍生物，通過EDAC的方法或EDAC和N-羥基琥珀酰亞胺聯合使用的方法進行活化并與載體溶液進行交聯反應，反應獲取物經透析純化后得到具有免疫原性的他克莫司免疫原。