[發明專利]一種高純度納豆激酶的制備方法

無效

• 申請號: 201210097463.5
• 申請日: 2012-04-01
• 公開（公告）號: CN102604917A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 范銘琦
• 申請（專利權）人: 范銘琦
• 主分類號: C12N9/56
• 分類號: C12N9/56;C12R1/125
• 代理公司: 上海三方專利事務所 31127
• 代理人: 吳干權

1.一種高純度納豆激酶的制備法，其特征在于由以下工藝步驟組成：

a、采用細菌劃線或涂布分離出單一的納豆枯草桿菌，并在固體和液體培養基上進行純種培養，所述的固體培養基質量濃度為蛋白胨10g/L、酵母粉5g/L、葡萄糖3.5g/L、氯化鈉10g/L、瓊脂15g/L，pH?7.0；所述的液體培養基質量濃度為：大豆蛋白胨10g/L、葡萄糖10g/L、牛肉膏5g/L、氯化鈉2g/L，pH?7.0，培養溫度為35-42℃，

b、采用液體深層發酵技術進行納豆枯草桿菌的發酵，發酵溫度為38～42℃；發酵時間為30-72hr，并通過震蕩、攪拌或通氣的方法供氧，

c、發酵后通過離心或過濾的方法去除菌體，獲得澄清的含納豆激酶的培養液，

d、上述培養液經過柱層析的方法去除其他雜質，納豆激酶從層析柱上洗脫，再經濃縮、干燥，然后用聚丙烯酰胺凝膠檢測，產物呈一28kDa的條帶，用纖維平板檢測可見清晰的纖維溶解圈。

2.如權1所述的一種高純度納豆激酶的制備法，其特征在于步驟(a)納豆枯草桿菌培養溫度為37℃。

3.如權1所述的一種高純度納豆激酶的制備法，其特征在于步驟(b)納豆枯草桿菌發酵溫度為42℃。

4.權1所述的一種高純度納豆激酶的制備法，其特征在于納豆枯草桿菌發酵時間為48hr或51hr。

5.權1所述的一種高純度納豆激酶的制備法，其特征在于柱層析方法為疏水層析或離子交換層析或先疏水層析再離子交換層析。

6.如權5所述的一種高純度納豆激酶的制備法，其特征在于所述的疏水層析采用疏水性樹脂。

7.如權6所述的一種高純度納豆激酶的制備法，其特征在于所述的疏水性樹脂是Phenyl瓊脂糖凝膠或Butyl瓊脂糖凝膠。

8.如權5所述的一種高純度納豆激酶的制備法，其特征在于所述的離子交換層析采用陽離子交換樹脂。

9.如權8所述的一種高純度納豆激酶的制備法，其特征在于所述的陽離子交換樹脂為CM瓊脂糖凝膠或SP瓊脂糖凝膠。

10.如權1所述的一種高純度納豆激酶的制備法，其特征在于所述的洗脫采用氯化鈉溶液梯度洗脫。