[發(fā)明專利]豬繁殖與呼吸綜合征病毒IgM抗體ELISA檢測(cè)試劑盒及其制備方法和其應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210095894.8
• 申請(qǐng)日: 2012-04-01
• 公開（公告）號(hào): CN103364551A
• 公開（公告）日: 2013-10-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖園園;漆世華;李建;劉潔;秦偉;謝紅玲;溫文生
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢中博生物股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;C12N7/02
• 代理公司: 北京智匯東方知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11391
• 代理人: 康正德;范曉斌

1.一種豬繁殖與呼吸綜合征病毒IgM抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，所述檢測(cè)試劑盒含有：包被豬IgM單克隆抗體的酶標(biāo)板、封閉液、樣品稀釋液、檢測(cè)用抗原、酶結(jié)合物、濃縮洗滌液、酶底物A溶液、酶底物B溶液和終止液，其中，所述檢測(cè)用抗原為純化的豬繁殖與呼吸綜合征病毒，所述的酶結(jié)合物為辣根過(guò)氧化物酶-抗PRRSV抗體酶結(jié)合物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒IgM抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，所述的包被豬IgM單克隆抗體的酶標(biāo)板孔包被豬IgM單克隆抗體的包被量為0.1μg-1μg/孔，包被稀釋液為0.05mol/L的碳酸鹽緩沖液，其中，所述碳酸鹽緩沖液的pH9.6。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒IgM抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，所述碳酸鹽緩沖液的組成為，每升碳酸鹽緩沖溶液中含有1.59g?Na₂CO₃和2.93g?NaHCO₃。

4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒IgM抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，所述封閉液選自質(zhì)量濃度為1-10％的BSA、質(zhì)量濃度為1-10％的脫脂牛奶的任一種或其組合。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒IgM抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，所述樣品稀釋液由質(zhì)量濃度為0.1-10％牛血清白蛋白和含有0.01-0.05％NaN₃的磷酸鹽緩沖液組成，其中，所述磷酸鹽緩沖溶液的濃度為0.01mol/L，pH7.2-7.4。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒IgM抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，所述濃縮洗滌液為含有0.5v/v％吐溫-20的磷酸鹽緩沖溶液，其中，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0.1mol/L，pH7.2-7.4。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒IgM抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，所述的酶底物A溶液為1％的3，3’-5，5’-四甲基聯(lián)苯胺溶液；所述的酶底物B溶液為含有0.012％雙氧水的乙酸鈉緩沖溶液，其中，乙酸鈉緩沖溶液的濃度為1％，pH5.0。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒IgM抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，所述終止液為1mol/L?H₂SO₄溶液。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒IgM抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，所述試劑盒中還含有陽(yáng)性對(duì)照液和陰性對(duì)照液，其中，所述的陽(yáng)性對(duì)照液用樣品稀釋液100倍稀釋抗PRRSV?IgM抗體的豬陽(yáng)性血清配制而成；所述的陰性對(duì)照液用樣品稀釋液100倍稀釋不含有抗PRRSV?IgM抗體的豬陰性血清配制而成。

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項(xiàng)所述的豬繁殖與呼吸綜合征病毒IgM抗體ELISA檢測(cè)試劑盒，所述純化的PRRSV抗原的制備方法為：用PRRSV?NVDC-JXA1株在Marc-145細(xì)胞上培養(yǎng)、擴(kuò)增，經(jīng)凍融，超聲波破碎后，離心去沉淀，上清超濾濃縮，經(jīng)蔗糖梯度離心純化，-40℃保存，作為包被用PRRSV抗原。