[發明專利]一種膜培養篩選鳥苷高產菌的方法

無效

• 申請號: 201210090866.7
• 申請日: 2012-03-31
• 公開（公告）號: CN102757898A
• 公開（公告）日: 2012-10-31
• 發明（設計）人: 程波;戶業麗
• 申請（專利權）人: 武漢工程大學
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 崔友明

1.一種膜培養篩選鳥苷高產菌的方法，包括有以下步驟：

1）將待篩選和復壯的鳥苷生產菌加入滅菌蒸餾水，置振蕩器上，混合均勻，制成稀釋度為10^-2-10^-7的菌懸液；

2）將菌懸液接種至膜培養系統中，靜置培養；

3）根據膜培養系統中鳥苷生產菌的菌落大小和形態進行判斷，初篩出鳥苷高產菌株和負變菌株。

2.根據權利要求1中所述膜培養篩選鳥苷高產菌的方法，其特征在于所述的膜培養系統由三部分組成，培養皿的底層為步驟1）所述的菌懸液混勻的營養成分不豐富的瓊脂培養基，中層為微孔濾膜，上層為浸潤了營養豐富的培養液的滅菌濾紙。

3.根據權利要求2中所述膜培養篩選鳥苷高產菌的方法，其特征在于所述的微孔濾膜孔徑為0.02μm，直徑為ψ85mm的聚碳酸酯微孔濾膜。

4.根據權利要求2或3中所述膜培養篩選鳥苷高產菌的方法，其特征在于所述的營養成分不豐富的瓊脂培養基為：雙酶糖30±5?g/L?，蛋白胨1±0.5?g/L?，磷酸二氫鉀4±0.5?g/L，硫酸銨6±2g/L，氯化鈉1±0.5?g/L，碳酸鈣20±5?g/L和硫酸鎂3±2?g/L。

5.根據權利要求2或3中所述一種膜培養篩選鳥苷高產菌的方法，其特征在于所述的營養成分豐富的的培養液為：酵母粉35±5?g/L，酵母膏10±5?g/L和玉米漿10±2?g/L。

6.根據權利要求1中所述膜培養篩選鳥苷高產菌的方法，其特征在于靜置培養條件為：28℃-38℃，培養時間為30?h-44?h。

7.根據權利要求2中所述膜培養篩選鳥苷高產菌的方法，其特征在于膜培養系統的制備方法為：待培養皿的底層的營養成分不豐富的瓊脂培養基凝固，培養6?h-8?h后，在其上置一層滅菌的聚碳酸酯微孔濾膜，其上層再布置浸潤了營養豐富的培養液的滅菌濾紙，于28℃?-38℃繼續培養22?h-36?h。

8.根據權利要求1中所述膜培養篩選鳥苷高產菌的方法，其特征在于步驟3）中的判斷方法是：膜培養系統中同樣條件下生長快，菌落大而潤澤的單菌落，為負變菌株，產苷量較低；生長較慢，菌落小而干燥的單菌落，為高產菌株。

9.根據權利要求8中所述膜培養篩選鳥苷高產菌的方法，其特征在于初篩后還包括進一步復篩，通過將篩選出的高產菌株和負變菌株接入搖瓶，28℃-38℃，轉速200?rpm-300?rpm，培養30?h-48?h，取離心后，清液采用HPLC法，準確測定鳥苷的產量。