[發明專利]6-(甲巰基)嘌呤免疫原和6-(甲巰基)嘌呤檢測試劑

有效

• 申請號: 201210089894.7
• 申請日: 2012-03-30
• 公開（公告）號: CN102643341A
• 公開（公告）日: 2012-08-22
• 發明（設計）人: 虞留明;田軍;袁紅霞;蔡江麗
• 申請（專利權）人: 蘇州博源醫療科技有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/795;C07K14/47;C07K1/113;C07K16/44;G01N33/532;G01N33/535;G01N33/543
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技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及6-(甲巰基)嘌呤免疫原、抗6-(甲巰基)嘌呤特異性抗體和6-(甲巰基)嘌呤檢測試劑。?

背景技術

6-(甲巰基)嘌呤(6-Methylmercaptopurine，6-MMP)，其結構式如式(Ⅰ)所示。?

6-MMP是6-(巰基)嘌呤(6-Mercaptopurine，6-MP)的代謝物。臨床上6-MP廣泛用于多種重要疾病的治療，包括：急性白血病、器官移植和一些自身免疫性疾病等，但此藥物使用不當可產生嚴重的甚至可危及生命的血液毒性。Mardini^[1]建議在使用6-MP時通過測定其代謝物6-MMP在病人血液中的濃度來決定6-MP的用藥劑量，該文獻結果顯示，當血液中的6-MMP濃度＜0.6μg/mL時，用藥劑量達不到相關療效；而當6-MMP濃度＞5.0μg/mL時，則會對肝臟造?成毒性。因此，一般需要將代謝物6-MMP的濃度控制在0.6μg/mL～5.0μg/mL之內。?

傳統檢驗6-MMP使用的方法是高效液相色譜法(High?Performance?Liquid?Chromatography，HPLC)和液相色譜/質譜-質譜聯用技術(LC/MS-MS)。這些方法操作復雜，費用高。美國專利(專利號US6946258)公開了一種6-MMP的抗體，但其設計的衍生物對6-MMP的結構改動太大，根據其專利中的衍生物很難獲得特異性強和靈敏度高的抗體。?

發明內容

本發明就是為了克服現有技術存在的檢測6-MMP的方法復雜的缺陷，采用6-MMP特異性抗體研制的免疫檢驗試劑彌補了這些缺點。本發明提供了一種檢測方便、靈敏度高的檢測試劑。本發明是通過以下技術方案實現的：?

本發明的一個目的在于提供一種6-MMP免疫原。?

本發明的另一個目的是提供一種6-MMP免疫原的合成方法。?

本發明的另一個目的在于提供使用本發明6-MMP免疫原制備得到的抗6-MMP特異性抗體。?

本發明的另一個目的是提供抗6-MMP特異性抗體的制備方法。?

本發明的再一個目的在于提供一種含有本發明抗6-MMP特異性抗體的檢測試劑。?

本發明的6-MMP免疫原，免疫原性高，可以誘導得到高效價的抗6-MMP特異性抗體。高效價的6-MMP特異性抗體研制的免疫試劑可直接測定反應底物6-MMP。該檢測方法特異性高，能夠準確地確定待測樣本中是否存在6-MMP，?同樣可以精確地測定6-MMP的含量。與HPLC等傳統方法相比，本發明提供的免疫檢測試劑具有操作簡單、速度快、檢測結果準確等優點。?

本發明所采取的技術方案如下：?

一種6-MMP免疫原，其結構式如式(Ⅰ)所示：?

式中，R為連接基團，載體具有免疫原性。?

R可以為-(CH₂)_n-COO-、-O-(CH₂)_n-COO-、-S-(CH₂)_n-COO-或-NH-(CH₂)_n-COO-等，n是1至20之間的整數。優選R為-(CH₂)_n-COO-，n值為1至10。更優選R為-(CH₂)₅-COO-。?

載體為具有免疫原性的物質，常選用蛋白質。優選為血清蛋白，血藍蛋白和甲狀腺球蛋白，更優選為牛血清蛋白。?

當R為-(CH₂)₅-COO-時，該6-MMP免疫原的合成途徑和方法如下：?

(1)6-MMP衍生物的合成：?

用10-100ml有機溶劑A溶解1.0-10.0g的6-MMP和1.0-5.0g的碳酸鹽，得到溶液1；將1.0-5.0g的6-溴己酸乙脂加入到5-50ml的有機溶劑A中，得到溶液2，將溶液1和2合并進行攪拌反應。將反應后的溶液用無機酸溶液中和，經有機溶劑B萃取分離后純化、干燥，得到白色固體狀6-(甲巰基)嘌呤衍生物。?

(2)載體溶液的制備：將具有免疫原性的蛋白質100-300mg溶于10-100ml的0.2M，pH?8.5磷酸鹽緩沖液中。?