[發(fā)明專利]6-(甲巰基)嘌呤免疫原和6-(甲巰基)嘌呤檢測(cè)試劑

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201210089894.7
• 申請(qǐng)日: 2012-03-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102643341A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-08-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 虞留明;田軍;袁紅霞;蔡江麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州博源醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/765
• 分類號(hào): C07K14/765;C07K14/795;C07K14/47;C07K1/113;C07K16/44;G01N33/532;G01N33/535;G01N33/543
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1.一種6-(甲巰基)嘌呤免疫原，其特征在于結(jié)構(gòu)式如式(Ⅰ)所示：

式中，R為連接基團(tuán)，載體具有免疫原性。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的6-(甲巰基)嘌呤免疫原，其特征在于R選自-(CH₂)_n-COO-、-O-(CH₂)_n-COO-、-S-(CH₂)_n-COO-或-NH-(CH₂)_n-COO-中的一種，n是1至20之間的整數(shù)，優(yōu)選n值為1至10。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的6-(甲巰基)嘌呤免疫原，其特征在于R為-(CH₂)₅-COO-。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的6-(甲巰基)嘌呤免疫原，其特征在于載體為具有免疫原性的蛋白質(zhì)，選自血清蛋白，血藍(lán)蛋白或甲狀腺球蛋白中的一種，優(yōu)選為牛血清蛋白。

5.一種如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的6-(甲巰基)嘌呤免疫原的制備方法，其特征在于包含以下步驟：

(1)用10-100ml有機(jī)溶劑A溶解1.0-10.0g的6-MMP和1.0-5.0g的碳酸鹽，得到溶液1；將1.0-5.0g的6-溴己酸乙脂加入到5-50ml的有機(jī)溶劑A中，得到溶液2，將溶液1和2合并進(jìn)行攪拌反應(yīng)。將反應(yīng)后的溶液用無(wú)機(jī)酸溶液中和，經(jīng)有機(jī)溶劑B萃取分離后純化、干燥，得到白色固體狀6-(甲巰基)嘌呤衍生物。

(2)將具有免疫原性的蛋白質(zhì)100-300mg溶于10-100ml的0.2M，pH?8.5磷酸鹽緩沖液中。

(3)用1.0-5.0ml的有機(jī)溶劑A溶解50-500mg的6-(甲巰基)嘌呤衍生物，通過(guò)1-乙基-3-(-3-二甲氨丙基)碳二亞胺進(jìn)行活化并與載體溶液進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)，經(jīng)透析純化后得到具有免疫原性的6-(甲巰基)嘌呤免疫原，

所述的有機(jī)溶劑A選自二甲基亞砜、二甲基甲酰胺、甲醇或乙醇中的一種，優(yōu)選為二甲基甲酰胺；

所述的有機(jī)溶劑B選自乙酸乙酯，乙醚或氯仿中的一種，優(yōu)選為乙酸乙酯，

所述的碳酸鹽為Na₂CO₃或K₂CO₃，優(yōu)選為Na₂CO₃；

所述的無(wú)機(jī)酸溶液為鹽酸溶液或硫酸溶液，優(yōu)選為鹽酸溶液。

6.一種抗6-(甲巰基)嘌呤特異性抗體，由權(quán)利要求1～5任意一項(xiàng)所述的6-(甲巰基)嘌呤免疫原免疫宿主動(dòng)物后生產(chǎn)得到。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的6-(甲巰基)嘌呤特異性抗體，其特征在于所述的抗體為多克隆抗體或單克隆抗體，優(yōu)選為多克隆抗體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的6-(甲巰基)嘌呤特異性抗體，其特征在于所述的宿主動(dòng)物選自家兔，山羊，小鼠，綿羊，豚鼠或馬中的一種，優(yōu)選為家兔。

9.一種如權(quán)利要求6-8中任一項(xiàng)所述的6-(甲巰基)嘌呤特異性抗體的制備方法，其特征在于包含以下步驟：

(1)用磷酸鹽緩沖液將合成的6-(甲巰基)嘌呤免疫原稀釋至0.5-5.0mg/mL；

(2)經(jīng)常規(guī)弗氏佐劑法對(duì)動(dòng)物進(jìn)行注射，注射后抽取動(dòng)物特異抗血清，得到有效的抗體。

10.一種6-(甲巰基)嘌呤檢測(cè)試劑，含有權(quán)利要求6-8所述的抗6-(甲巰基)嘌呤特異性抗體和指示試劑，所述的指示試劑選自酶試劑、放射性同位素試劑、熒光試劑或化學(xué)發(fā)光試劑中的一種。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的6-(甲巰基)嘌呤檢測(cè)試劑，其特征在于所述的指示試劑為酶試劑，由6-(甲巰基)嘌呤酶標(biāo)偶聯(lián)物和酶底物所組成。