[發(fā)明專利]一種鑒定鼠尾藻性別的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201210089750.1
• 申請日: 2012-03-30
• 公開（公告）號: CN102605086A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉福利;王飛久;孫修濤;汪文俊
• 申請（專利權(quán)）人: 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 青島聯(lián)智專利商標事務(wù)所有限公司 37101
• 代理人: 李升娟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種鑒定鼠尾藻性別的方法。

背景技術(shù)

鼠尾藻（Sargassum?thunbergii）是我國沿海一種常見的褐藻，生活在中潮帶和低潮帶的巖石上，其營養(yǎng)豐富、均衡，富含海藻多糖、甘露醇、礦物質(zhì)及其他活性物質(zhì)，可用作食品、餌（飼）料、藥用及工業(yè)用原料，具有重要的開發(fā)價值。另外，鼠尾藻在潮間帶生態(tài)系統(tǒng)中占有重要地位，對近海環(huán)境修復(fù)具有重要作用。

近年來，隨著海參養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，鼠尾藻作為海參天然優(yōu)質(zhì)餌料，被大規(guī)模采收，致使其野生資源銳減甚至枯竭，進而威脅到潮間帶生態(tài)系統(tǒng)平衡。因此，為從根本上解決鼠尾藻的供需矛盾，進行鼠尾藻人工養(yǎng)殖勢在必行。而優(yōu)良苗種是鼠尾藻人工養(yǎng)殖的基礎(chǔ)和前提。當前，基于有性繁殖的規(guī)?；斯び缂夹g(shù)被認為是解決鼠尾藻養(yǎng)殖苗種需求的關(guān)鍵技術(shù)。在利用鼠尾藻有性繁殖規(guī)律進行人工育苗時，需要提前準備種藻、并控制雌雄個體的合適比例。但是由于未成熟鼠尾藻雌雄個體外觀相似，很難區(qū)分雌雄個體，目前尚無有效的鑒定方法，只有待其性成熟后，根據(jù)雌、雄生殖托的形態(tài)差異來鑒別雌雄個體，這就需要專業(yè)知識和豐富經(jīng)驗，費時耗力且準確率不高。因此，建立鼠尾藻尤其是未成熟鼠尾藻雌雄鑒定的有效方法，在鼠尾藻人工育苗過程中具有重要的應(yīng)用價值；另外，也對鼠尾藻群體遺傳結(jié)構(gòu)、性別決定與分化等基礎(chǔ)研究具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中以生殖托的形態(tài)差異來鑒定鼠尾藻性別的方法存在的費時費力且準確率不高的缺點，本發(fā)明提供了一種基于PCR（Polymerase?Chain?Reaction）的鑒定鼠尾藻性別的方法，可應(yīng)用于鼠尾藻尤其是未成熟鼠尾藻的雌雄個體鑒別中，可顯著提高鼠尾藻性別鑒定的準確度和效率。

為實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案予以實現(xiàn)：

一種鑒定鼠尾藻性別的方法，所述方法包括以下步驟：

鼠尾藻基因組DNA的提取和純化；利用特異性分子標記S64對基因組DNA進行PCR擴增；所述S64能擴增出特異性標記F289即為雌性鼠尾藻，不能擴增出的即為雄性鼠尾藻，

所述特異性分子標記S64為：5′-CCTCCAGTGT-3′；

所述特異性標記F289序列如SEQ?ID?No:1所示。

對技術(shù)方案的進一步改進：選取鼠尾藻的幼嫩組織提取基因組DNA。

對技術(shù)方案的進一步改進：所述幼嫩組織為嫩葉、生殖托或次生小枝。

對技術(shù)方案的進一步改進：PCR擴增體系為：10?μl反應(yīng)體積中含有50?mM?Tris-HCl，1.5?mM?MgCl₂，0.2?mM?DNTP，0.8%?聚蔗糖400，1?mM?酒石黃，5?μM?BSA，30?ng引物，5?ng模板DNA，0.5單位Taq?DNA聚合酶。

對技術(shù)方案的進一步改進：所述Tris-HCl?的pH為8.3。

對技術(shù)方案的進一步改進：PCR擴增程序為：94?℃?4分鐘，按94?℃?20秒，36?℃?20秒，72?℃?60?秒，進行40個循環(huán)，最后72?℃保溫5?分鐘。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是：本發(fā)明不僅可對性成熟的鼠尾藻進行有效的性別鑒定，還可對其他發(fā)育階段的鼠尾藻進行高效的性別鑒定，不受時間限制，可實現(xiàn)鼠尾藻整個發(fā)育過程中的性別鑒定；而且應(yīng)用本發(fā)明所述鑒定方法可以提高鼠尾藻性別鑒定的準確度和效率，解決未成熟鼠尾藻性別無法鑒定的技術(shù)難題。

結(jié)合附圖閱讀本發(fā)明的具體實施方式后，本發(fā)明的其他特點和優(yōu)點將變得更加清楚。

附圖說明

圖1是本發(fā)明中特異性分子標記S64在雌、雄鼠尾藻基因池及個體中的PCR擴增電泳圖，其中M代表是分子量標準；FP代表雌性鼠尾藻基因池；MP代表雄性鼠尾藻基因池；F1-F5分別代表5個雌性鼠尾藻個體；M1-M5分別代表5個雄性鼠尾藻個體。?

圖2是本發(fā)明中特異性分子標記S64在雌、雄鼠尾藻個體中的PCR擴增電泳圖，其中M代表是分子量標準；F1-F12分別代表12個雌性鼠尾藻個體；M1-M12分別代表12個雄性鼠尾藻個體。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖和具體實施方式對本發(fā)明的技術(shù)方案作進一步詳細的說明。

實施例1?

1、鼠尾藻基因組DNA的快速提取和純化

因為鼠尾藻幼嫩組織細胞分裂較為旺盛，DNA復(fù)制頻率較高，次生代謝物質(zhì)累積量較少，有益于DNA的提取和純化，故選取鼠尾藻的幼嫩組織，如嫩葉、生殖托或次生小枝等作為DNA提取實驗材料。