[發明專利]多發性骨髓瘤易感基因無創檢測試劑盒

無效

• 申請號: 201210086694.6
• 申請日: 2012-03-28
• 公開（公告）號: CN102605080A
• 公開（公告）日: 2012-07-25
• 發明（設計）人: 潘加奎;姜麗
• 申請（專利權）人: 解碼(上海)生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，涉及醫學和生物技術，具體涉及一種多發性骨髓瘤易感基因檢測試劑盒，根據檢測結果從基因層面評估多發性骨髓瘤發病的風險級別，并作為預防和治療多發性骨髓瘤的方向指導。

背景技術

多發性骨髓瘤(multiple?myeloma，MM)是漿細胞異常增生的惡性腫瘤。一種進行性的腫瘤性疾病。其特征為骨髓漿細胞瘤和一株完整性的單克隆免疫球蛋白(IgG，IgD或IgE)或Bence?Jones蛋白質過度增生。多發性骨髓瘤常伴有多發性溶骨性損害，高鈣血癥，貧血，腎臟損害，而且對細菌性感染的易感性增高，正常免疫球蛋白的生成收到阻抑。發病率估計為2-3/10萬，男女比例為1.6∶1，大多患者年齡＞40歲。

MTHFR全稱5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶編碼基因，主要作用是在葉酸代謝通路中將5，10-亞甲基四氫葉酸轉化為具有生物學功能的5-甲基四氫葉酸。5-甲基四氫葉酸可以進一步進入甲基傳遞通路，通過同型半胱氨酸的重新甲基化過程間接為DNA甲基化和蛋白質甲基化提供并且使血液中的同型半胱氨酸水平保持在一個較低的水平。此外葉酸的中間代謝產物在核苷酸合成過程中也有重要的作用，通過一碳單位代謝為嘌呤環的形成提供碳原子。MTHFR基因的缺陷將導致機體多個基礎生化過程的紊亂，包括細胞周期調控、DNA復制、DNA以及蛋白質甲基化修飾等，并進而引發神經管缺陷、癌癥、心腦血管疾病等多種病癥。

NQO1基因編碼還原型輔酶/醌氧化還原酶，又稱為DT-硫辛酰胺脫氫酶，是一種黃素酶，NQO1在器官中分布廣泛，但在肝臟、腎臟、胃腸道中水平最高。NQO1酶可受到各種化學物的誘導，如多環芳烴、氫醌、丙烯酸鹽、花莖甘藍等。NQO1酶屬于II相代謝酶，在體內與其他I、II相代謝酶一起構成了體內對外源毒性物質的代謝網絡，在機體的解毒代謝中發揮著重要作用。NQO1的多態性會降低NQO1酶對化學物質的解毒能力，增加了患多發性骨髓瘤等疾病的風險。

GSTT1即谷胱甘肽硫轉移酶T1，是負責多種致癌物質代謝的酶類家族GSTs中的一員。GSTT1的功能是使各類親電子化合物，如藥物、環境毒素、氧化鏈產物等與谷胱甘肽結合并進入下一步的代謝步驟。GSTT1具有一種多態型一null基因型，即缺失GSTT1基因。國內外的眾多研究表明GSTT1基因的這種多態現象與很多類型的癌癥發病相關。這可能是因為GSTT1基因的缺失會使得機體解毒能力發生下降，致癌物質在體內積蓄，將大大提高罹患各種癌癥的風險度。

綜上所述，鑒于MTHFR基因，NQO1基因，GSTT1基因在多發性骨髓瘤癌變過程中有著不可忽視的作用，可以將上述基因作為遺傳易感因素來檢測出受檢者在多發性骨髓瘤發生相關的基因單核苷酸位點基因型，及時篩查出易患多發性骨髓瘤的高危人群，從而有針對性的預防和治療多發性骨髓瘤，這對于降低多發性骨髓瘤的發病率有非常重要的意義。

發明內容

基于MTHFR基因上C677T位點及A1298C位點多態性，NQO1基因上C609T位點多態性，GSTT1基因缺失與否(Present/Null)位點多態性的4個單核苷酸多態性位點基因型可作為評估多發性骨髓瘤發病的危險因子的基礎上，本發明提供一種多發性骨髓瘤易感基因檢測試劑盒。

該試劑盒包括：

檢測MTHFR基因上C677T位點及A1298C位點多態性，NQO1基因上C609T位點多態性，GSTT1基因缺失與否(Present/Null)位點多態性的4個單核苷酸多態性位點基因型的特異性引物對及DNA測序引物；

PCR反應組件(包括Taq酶、dNTP混合液、反應緩沖液、ddH2O等)；

PCR產物純化組件(包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等)；

DNA測序反應組件(包括BigDye?mix，EDTA溶液、100％乙醇溶液、70％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等)。

本發明試劑盒的組分和含量包括：

PCR反應體系：10×PCR反應緩沖液2.5ul；25mM?dNTP混合液0.2ul；5U/ul?Taq?DNA聚合酶0.125ul；20uM特異性引物對(每條引物各0.25ul)；ddH2O19.175ul。

PCR產物純化體系：1U/ul?SAP酶0.75ul；10U/ul?ExoI酶0.375ul；ddH2O3.875ul。